ШТАММ ACINETOBACTER SPECIES, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ВОДЫ И ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ

ШТАММ ACINETOBACTER SPECIES, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ВОДЫ И ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ


RU (11) 2064017 (13) C1

(51) 6 C12N1/20, C02F3/34, B09C1/10 

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
Статус: по данным на 26.12.2007 - прекратил действие 

--------------------------------------------------------------------------------

(21) Заявка: 93009595/13 
(22) Дата подачи заявки: 1993.02.23 
(45) Опубликовано: 1996.07.20 
(56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: Авторское свидетельство СССР N 1076446, кл. C 12 N 15/00, 1988. 
(71) Заявитель(и): Ушков Сергей Борисович; Ильинская Надежда Владимировна 
(72) Автор(ы): Ушков Сергей Борисович; Ильинская Надежда Владимировна 
(73) Патентообладатель(и): Ушков Сергей Борисович; Ильинская Надежда Владимировна 

(54) ШТАММ ACINETOBACTER SPECIES, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ВОДЫ И ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ 

Использование: в микробиологической промышленности, а также для очистки почвы и воды от углеводородов нефти и нефтепродуктов в различных климатических зонах. Сущность применения: предложен новый штамм Acinetobacter species, обладающий высокой биодеградирующей активностью по отношению к углеводородам нефти и нефтепродуктов и термоустойчивостью, достаточной для сохранения высокого титра активных клеток при распылительной сушке. 2 табл. 


ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ



Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма бактерий, который может быть использован для биологической очистки почвы и воды от углеводородов нефти и нефтепродуктов в различных климатических зонах.

Известно несколько штаммов бактерий, которые могут разлагать углеводороды нефти. Например, Flavobacterium tirrennicum (1), Micrococcus species 1M (2), Pseudomonas species (3).

Недостатком для вышеперечисленных штаммов является узкий спектр избирательного действия: деструкция углеводородов только в виде пленки на поверхности воды и неспособность осуществлять утилизацию остаточной замазученности почвы.

Наиболее близким по достигаемому результату к предлагаемому штамму является штамм Pseudomonas putida 36, используемый для очистки воды и почвы от нефтепродуктов (4). На его основе производится бактериальный препарат "Путидойл" по ТУ 64-16-75-91.

Однако степень окисления углеводородов нефти клетками штамма Pseudomonas putida 36 является недостаточно высокой (68,4 74,5%) (4).

Кроме того, при промышленном производстве препарата на основе штамма Pseudomonas putida 36 использование наиболее доступного и дешевого метода высушивания метода распылительной сушки не позволяет получить препарат с титром клеток более 1010 вследствие инактивации клеток под действием высоких температур (+60oC).

Поэтому целью настоящего изобретения является создание нового штамма, обладающего высокой степенью биодеградирующей активности по отношению к углеводородам нефти и нефтепродуктов и термоустойчивостью, достаточной для сохранения высокого титра активных клеток при распылительной сушке.

Поставленная цель достигается использованием штамма Acinetobacter species JN-2, полученного в результате естественного отбора активных и термоустойчивых вариантов исходного штамма, выделенного из почвы участка, загрязненного нефтепродуктами.

Штамм депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов "ВНИИгенетика" под номером ВКПМ В-5971.

Полученный штамм имеет следующие культурально-морфологические и биохимические признаки.

Культурно-морфологические признаки: короткие, толстые, неподвижные, грамотрицательные палочки, расположенные попарно или в коротких цепочках, величина клеток (20 часов, среда Хотингера) 1,0 1,5 мкм, при переходе в стационарную фазу форма приближается к коккам. Спор не образуют.

На мясопептонном агаре суточные колонии 3 5 мм, круглые, слабовыпуклые, сходящиеся к вершине, с ровным краем, консистенция маслянистая, пигмент не образует.

На мясопептонном бульоне равномерное помутнение, при стоянии образуется неустойчивая поверхностная пленка, серовато-белый осадок.

Биохимические признаки:

Оксидазная проба отрицательная, каталазная положительная.

Отношение к источникам углерода: окислительно-ферментативный тест на использование глюкозы (Тест Хью-Лейфсона). Аэробное окисление глюкозы. Образование кислоты из Д-рибозы, Д-ксилозы, 10% лактозы, L-арабинозы.

Отношение к источникам азота: рост на минеральной среде с ионами аммония. Утилизирует ацетат, цитрат на среде Симонса.

Реакция на протеиназы слабо положительная.

Сероводород, индол не образует.

Кровяной агар не гомолизирует.

Аэроб. Широкий диапазон роста: от 4oC до 44oC. При кратковременном воздействии высокой температуры (до 60o) клетки сохраняет жизнеспособность, что позволяет при промышленном производстве штамма использовать распылительную сушку.

Рост при pH 7,00,2 (оптимальное значение).

Отношение к углеводородам: способен утилизировать нефть различного состава, (остаточную замазученность), парафин, дизельное топливо, бензин, вазелиновое масло, смазочное масло, гексан, ундекан, тетрадекан, ксилол, бензол, толуол, фенол.

Способен биодеградировать углеводороды нефти и нефтепродуктов в виде водорастворимой, эмульгированной, пленочной формы и осуществлять утилизацию остаточной замазученности почвы.

Отношение к антибиотикам: не чувствителен к пенициллину.

Хранение:

Хранить штамм рекомендуется в виде лиофильно-высушенной культуры в стеклянных запаянных ампулах.

Сущность заявляемого изобретения поясняется следующими примерами.

Пример 1:

Штамм Acinetobacter species JN-2 выращивают при температуре 301oC в течение 18 20 часов в пробирках, на скошенной среде МПА pH среды 7,00,2

Выросшую культуру смывают 5 мл физраствора в колбу и определяют титр исходного посевного материала.

В качалочные колбы объемом 750 мл наливают по 200 мл отстойной стерильной водопроводной воды, по 3 мл строительного 5%-ного раствора аммофоса (по ГОСТ 18918-85) в качестве источника азота и фосфора и по 1 г нефти парафинового основания, и вносит посевной материал в количестве 1,5107 кл/мл. Колбы помещают в термостат при температуре 301oC. Через определенное время выдержки в термостате (10, 20, 30 суток) из проб хлороформом экстрагируют остатки углеводородов нефти. После испарения хлороформа гравиметрически определяют их количество.

По разности в массах количества нефти в экстракте контрольной пробы (выдержка пробы в термостате то же количество времени, но без внесения посевного материала) и в экстракте рабочей пробы, рассчитывают процент утилизированной нефти в зависимости от времени. Полученные результаты представлены в табл. 1

Пример 2:

Аналогичен примеру 1, но вместо нефти парафинистого основания используют нефть нафтено-ароматического основания. Результаты приведены в табл. 1

Пример 3:

Аналогичен примеру 1, но вместо штамма Acinetobacter species JN-2 используют штамм Pseudomonas putida 36. Результаты биодеградации нефти штаммом Ps. putida 36 представлены в табл. 1

Пример 4:

Аналогичен примеру 3, но вместо нефти парафинового основания используют нефть нафтено-ароматического основания. Результаты приведены в табл.1

Пример 5:

Штамм Acinetobacter species JN-2 выращивают в аэробных условиях при температуре 302oC на жидкой питательной среде следующего состава (вес):

Гидролизат крахмала 2,0

Кукурузный экстракт 1,0

Цинк сернокислый 0,002

Калий сернокислый 0,1

Магний сернокислый 0,06

Диаммоний фосфат 0,2

Пропинол 0,1

Мел 0,1

Нефть 0,06

Вода Остальное

pH 7,00,2

Полученную культурную жидкость с титром 5,1109 высушивают на распылительной сушилке при температуре на выходе 60oC. Титр клеток в 1 г сухой биомассы составил 6,21011 кл/г (см. табл.2).

Пример 6:

Штамм Pseudomonas putida 36 выращивают в аэробных условиях на жидкой питательной среде состава по примеру 5.

Полученную культуральную жидкость с исходным титром 4,7109 кл/мл высушивают на распылительной сушилке при температуре на выходе 60oC. Титр клеток в 1 г сухой биомассы составил 2,01010 кл/г (см. табл.2).

Как видно из табл.1, количество нефти парафинистого основания, утилизированной штаммом Acinetobacter sp. SN-2 за 10, 20, 30 суток, достигает соответственно 46, 74, 92% Тогда как количество той же нефти, утилизированной штаммом Pseudomonas putida 36 за 10, 20, 30 суток, составило соответственно 39, 58, 76%

Количество нефти нафтено-ароматического основания, утилизированного предлагаемым штаммом за 10, 20, 30 суток, составило 72, 68, 4, 88% соответственно. Тогда как количество той же нефти, утилизированной шт. pseudomonas putida 36 за 10, 20, 30 суток, составило 32, 50, 70,2% Данные табл.2 подтверждают, что клетки предлагаемого штамма более термоустойчивы (титр 9,21011) по сравнению с известным (титр 2,01010).

Таким образом, предлагаемый штамм так же как и штамм Pseudomonas putida 36, обладает широким спектром избирательного действия, что позволяет использовать его при биологической очистке воды и почвы от углеводородов нефти и нефтепродуктов, способен утилизировать нефти различного состава и другие углеводороды органических соединений.

Преимуществом предлагаемого штамма по сравнению с прототипом является более высокая деградирующая активность (см. табл.1).

Высокая термоустойчивость клеток по сравнению с известным позволяет использовать при промышленном производство более дешевый и производительный способ распылительной сушки.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. А.с. СССР N 1409594, кл. 3/34, 1988, Бюл. N 26.

2. А.с. СССР N 1304401, кл. 1/20, 1985.

3. А.с. СССР N 1395667, кл. 1/20, 1988, Бюл. N 18.

4. А.с. СССР N 1076446, кл. 15/00, 1988, Бюл. N 8 (прототип). 


ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ



Штамм бактерий Acinetobacter species ВКПМ В-5971, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов.




ПРОЧИТАТЬ НУЖНО ВСЕМ !
Судьба пионерских изобретений и научных разработок, которым нет и не будет аналогов на планете еще лет сорок, разве что у инопланетян



Независимый научно технический портал
Воздухо- и водоочистка. Опреснительные установки






СОВЕРШЕННО БЕСПЛАТНО!
Вам нужна ПОЛНАЯ ВЕРСИЯ данного патента? Сообщите об этом администрации портала. В сообщении обязательно укажите ссылку на данную страницу.


ПОИСК ИНФОРМАЦИИ В БАЗЕ ДАННЫХ


Режим поиска:"и" "или"

Инструкция. Ключевые слова в поле ввода разделяются пробелом или запятой. Регистр не имеет значения.

Режим поиска "и" означает, что будут найдены только те страницы, где встречается каждое из ключевых слов. Например, при запросе "очистка воды" будет найдено словосочетание "очистка воды". При использовании режима "или" результатом поиска будут все страницы, где встречается хотя бы одно ключевое слово ("очистка" или "воды").

В любом режиме знак "+" перед ключевым словом означает, что данное ключевое слово должно присутствовать в найденных файлах. Если вы хотите исключить какое-либо слово из поиска, поставьте перед ним знак "-". Например: "+очистка -воды".

Поиск выдает все данные, где встречается введенное Вами слово. Например, при запросе "сток" будут найдены слова "стоков", "стоки" и другие. Восклицательный знак после ключевого слова означает, что будут найдены только слова точно соответствующие запросу "сток!".


Устройства и способы водоочистки | Опреснительные установки. Дистилляторы | Устройства и способы воздухоочистки


Рейтинг@Mail.ru