ШТАММ БАКТЕРИЙ BRUCELLA OVIS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ R- БРУЦЕЛЛЕЗНЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ
(51) 6 C12N1/20, A61K39/10
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Статус: по данным на 18.07.2007 - прекратил действие
--------------------------------------------------------------------------------
(14) Дата публикации: 1996.01.10
(21) Регистрационный номер заявки: 5057381/13
(22) Дата подачи заявки: 1992.07.31
(45) Опубликовано: 1996.01.10
(56) Аналоги изобретения: 1. Joint FAO/WHO Expert Committee on Brucellosis. Sixth Report. World Health Organisation. Technical Report Series, Geneva, 1986.-133p. 2. Методические рекомендации по приготовлению и применению овисного антигенного эритроцитарного диагностикума. С.П.Меринов, В.А.Широков, Л.П.Репина и др. 3. Методические рекомендации по получению высокоактивных гипериммунных противобруцеллезных сывороток. Е.П.Голубинский, Т.Ю.Загоскина, Л.П.Репина и др. Иркутск: 1988, с.9.
(71) Имя заявителя: Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока
(72) Имя изобретателя: Репина Л.П.; Калиновский А.И.; Загоскина Т.Ю.
(73) Имя патентообладателя: Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока
(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ BRUCELLA OVIS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ R- БРУЦЕЛЛЕЗНЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ
Использование: микробиология, специфический бруцеллезный R-антиген, диагностическая сыворотка, R-эритроцитарный диагностикум, бруцеллоз. Сущность изобретения: штамм Brucella ovis И-107 выделен из семенников барана, находится в стойкой R-форме, инагглютинабелен и инагглютиногенен, так как реакции агглютинации с поливалентной бруцеллезной и моноспецифическими сыворотками (антиабортус), антимелитензис) отрицательные, а заражение этим штаммом подопытных животных не вызывает у них образование бруцеллезных S-антител. Штамм Brucella ovis И-107 депонирован в коллекции живых культур лаборатории бруцеллеза НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи под N 792. Антигенные свойства: при иммунизации кроликов вызывает образование специфических R-антител. Средний титр антител в ИФА - 1 : 1638400 126300, в РИД 1 : 16 8,3. R-антиген применяется для конструирования R-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума, диагностические титры которого колеблются от 1 : 800 до 1 : 3200.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к микробиологии и может использоваться как штамм-продуцент специфических бруцеллезных R-антигенов, необходимых для получения кроличьей диагностической сыворотки к бруцеллам в R-форме, а также как антиген для конструирования R-эритроцитарного диагностикума. Известен референтный штамм B. ovis 63/290, обладающий характерными для данного рода культурально-морфологическими и биохимическими свойствами [1]
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является штамм B.ovis И-61, используемый как антиген для конструирования R-эритроцитарного диагностикума [2, 3]
Недостатком вышеназванных штаммов является содержание в них клеток в S-форме, что не позволяет использовать их для получения R-специфического антигена.
Целью изобретения является изыскание штамма, находящегося в стойкой R-форме и продуцирующего специфический R-бруцеллезный антиген.
Штамм Brucella ovis И-107 выделен из семенников барана, депонирован в коллекции живых культур Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН под N 792 и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.
Культурально-морфологические признаки. Мелкие полиморфные коккобациллы размером 0,4 х 0,8-0,4-2,2 мкм с выраженным полиморфизмом. Спор и капсул не образуют. Неподвижные. Грамотрицательные. На бульоне Мартена рН 6,8 при 37оС через 48 ч образуется плотный сероватый осадок с просветлением самой жидкости. На агаре Мартена (рН 6,8) с добавлением 1% глюкозы и 1,5% глицерина и 10-15% бычьей или лошадиной сыворотки образуют выпуклые колонии правильной округлой формы с ровными краями, гладкой поверхностью, влажные, маслянистые, белесоваты при падающем и янтарно-желтые в проходящем свете диаметром 2-3 мм.
Физиолого-биохимические признаки. Анаэроб растет в присутствии повышенного содержания СО2. Температурный диапазон роста 20-40оС. Оптимальная температура роста 37оС. Оптимум Ph 6,6-7,4.
Штамм не выделяет сероводород, не лизируется бактериофагом Тб, растет на средах с тионином в разведениях краски 1 50.000, 1 100.000. На питательных средах с добавлением основного фуксина, сафранина, метилвиолета рост бруцелл отсутствует. Уреазной и бактериоциногенной активностью не обладает. Штамм инагглютинабельный и инагглютиногенный, так как реакции агглютинации с поливалентной бруцеллезной и моноспецифическими сыворотками (антиабортус, антимелитензис) отрицательные, а заражение этим штаммом подопытных лабораторных животных не вызывает у них образование бруцеллезных S-антител.
Вирулентность штамма низкая: введение морским свинкам штамма в дозе 32 х 109 микробов не вызывает генерализованной формы инфекции, т.е. установить МИД невозможно. ИИ равен 30,1% а ИД50 соответствует 3,1 х 109 микробам. Хранение штамма осуществляют в лиофильном состоянии в ампулах. После лиофилизации все свойства штамма сохраняются.
Антигенные свойства. При иммунизации кроликов вызывает образование специфических R-антител.
Штамм Brucella ovis И-107 отличается от штамма прототипа B. ovis 63/290 отсутствием в популяции клеток в S-форме, а также устойчивыми биологическими свойствами.
Сущность изобретения поясняется следующим конкретным примером использования штамма B. ovis И-107.
П р и м е р. Бактерии смывают 0,9%-ным раствором хлорида натрия и однократно отмывают этим же раствором. Микробную массу инактивируют трехкратным объемом охлажденного до 4оС ацетона в течение 6 сут. со сменой ацетона через 48 ч и контролируют специфическую стерильность.
При изучении отдельных антигенных комплексов наиболее перспективным для конструирования диагностических препаратов оказались водно-солевые фракции целых клеток штамма B. ovis И-107 [3]
Получение водно-солевых экстрактов. Водно-солевые АГ получают экстрагированием инактивированных клеток штамма B. ovis И-107 теплым 10%-ным раствором хлорида натрия в течение 4 ч при 37оС, непрерывно встряхивая. Суспензию центрифугируют (6103 q, 30 мин). Супернатант диализуют против дистиллированной воды, лиофилизируют и хранят при 4оС.
Таким образом, штамм может быть использован для получения растворимых антигенов методом водно-солевой экстракции, которые используются для получения кроличьих высокотитражных R-сывороток. Средний титр которых в ИФА 1 1638400126300, в РИД 1 168,3. Также водно-солевой R-антиген применяется для создания R-бруцеллезного эритроцитарного диагностикума, диагностические титры которого колеблются от 1 800 до 1 3200.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Штамп бактерий Brucella Ovis НИИИЭМ N 792, используемый для получения R-бруцеллезных диагностикумов.
Независимый научно технический портал
На главную страницу раздела
