ÈÌÌÓÍÎÄÅÏÐÅÑÑÀÍÒ
(51) 6 A61K31/04
(12) ÎÏÈÑÀÍÈÅ ÈÇÎÁÐÅÒÅÍÈß Ê ÏÀÒÅÍÒÓ ÐÎÑÑÈÉÑÊÎÉ ÔÅÄÅÐÀÖÈÈ
Ñòàòóñ: ïî äàííûì íà 17.09.2007 - ïðåêðàòèë äåéñòâèå
--------------------------------------------------------------------------------
(14) Äàòà ïóáëèêàöèè: 1995.10.10
(21) Ðåãèñòðàöèîííûé íîìåð çàÿâêè: 4741000/14
(22) Äàòà ïîäà÷è çàÿâêè: 1989.07.14
(45) Îïóáëèêîâàíî: 1995.10.10
(56) Àíàëîãè èçîáðåòåíèÿ: Àâòîðñêîå ñâèäåòåëüñòâî ÑÑÑÐ N 1047902, êë. A 61K 31/04, 1979. Ì.Ä.Ìàøêîâñêèé. Ëåêàðñòâåííûå ñðåäñòâà. Ì.: Ìåäèöèíà. 1987, ÷.2, ñ.175-176.
(71) Èìÿ çàÿâèòåëÿ: Èíñòèòóò êëèíè÷åñêîé èììóíîëîãèè ÑÎ ÀÌÍ ÑÑÑÐ; Êðàñíîÿðñêèé ìåäèöèíñêèé èíñòèòóò; Êðàñíîÿðñêàÿ ãîñóäàðñòâåííàïÿ òåõíîëîãè÷åñêàÿ àêàäåìèÿ
(72) Èìÿ èçîáðåòàòåëÿ: Ïëîòíèêîâ Í.Þ.; Ïðîòîïîïîâ Á.Â.; Ñåìè÷åíêî Å.Ñ.; Êîíåíêîâ Â.È.; Ñóáî÷ Ã.À.; Áåëÿåâ Å.Þ.; Áåçãà÷åâ Â.Ã.
(73) Èìÿ ïàòåíòîîáëàäàòåëÿ: Êðàñíîÿðñêàÿ ãîñóäàðñòâåííàÿ òåõíîëîãè÷åñêàÿ àêàäåìèÿ
(54) ÈÌÌÓÍÎÄÅÏÐÅÑÑÀÍÒ
Èçîáðåòåíèå îòíîñèòñÿ ê ìåäèöèíå è ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàíî äëÿ ïðîôèëàêòèêè è ëå÷åíèÿ çàáîëåâàíèé, ñâÿçàííûõ ñ íàðóøåíèåì ñèñòåìû èììóíèòåòà. Öåëüþ èçîáðåòåíèÿ ÿâëÿåòñÿ ðàñøèðåíèå ñôåðû âîçìîæíîãî ïðèìåíåíèÿ õèìè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé ðÿäà íèòðîçîïèðèäîëîâ. Ïðåäëîæåííûé ïðåïàðàò ýôôåêòèâíåå íà 70-100% àçàòèîïðèíà (èìóðàíà) ïî ñïîñîáíîñòè âëèÿòü íà àíòèòåëîîáðàçîâàíèå â ñåëåçåíêå. Òàê ïðè âíóòðèáðþøèííîì 4-êðàòíîì ââåäåíèè âûñîêîîòâå÷àþùèì ìûøàì ëèíèè ÑÂÀ (ïîñëå èììóíèçàöèè ýðèòðîöèòàìè áàðàíà) â äîçå 30 ìã/ìã ìàññû àçàòèîïðèíà êîëè÷åñòâî ÀÎÊ â ñåëåçåíêå ñíèæàëîñü (íåäîñòîâåðíî) íà 24% Ïðåäëîæåííûé èììóíîäåïðåññàíò ïðè îäíîêðàòíîì ââåäåíèè îäíîâðåìåííî ñ ýðèòðîöèòàìè áàðàíà â äîçå 20 ìã/êã ìàññû äîñòîâåðíî ñíèæàë êîëè÷åñòâî ÀÎÊ íà 74% â èíäóêòèâíóþ ôàçó è ïðàêòè÷åñêè ïîëíîñòüþ îòìåíÿë èììóííûé îòâåò â ïðîäóêòèâíóþ. 2 òàáë.
ÎÏÈÑÀÍÈÅ ÈÇÎÁÐÅÒÅÍÈß
Èçîáðåòåíèå îòíîñèòñÿ ê ìåäèöèíå è ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàíî äëÿ ïðîôèëàêòèêè è ëå÷åíèÿ çàáîëåâàíèé, ñâÿçàííûõ ñ íàðóøåíèåì ñèñòåìû èììóíèòåòà.
Èçâåñòíî ïðèìåíåíèå íèòðîçîïèðèäèíîëîâ äëÿ ïîâûøåíèÿ ïðî÷íîñòè ðåçèí, ïîëó÷àåìûõ èç õëîðïðîïåíîâîãî êàó÷óêà, è óâåëè÷åíèÿ ñêîðîñòè âóëêàíèçàöèè ðåçèíîâîé ñìåñè. Îäíàêî èììóíîìîäóëèðóþùèå ñâîéñòâà íèòðîçîïèðèäèíîëîâ íå èññëåäîâàíû.
Öåëüþ èçîáðåòåíèÿ ÿâëÿåòñÿ ðàñøèðåíèå ñôåðû âîçìîæíîãî ïðèìåíåíèÿ õèìè÷åñêèõ ñîåäèíåíèé ðÿäà íèòðîçîïèðèäèíîëîâ îáùåé ôîðìóëû ãäå R ìåòèë, R'-îêñè;
R ìåòèë R'-ìåòèë;
è èõ êàëèåâûõ ñîëåé, à òàêæå ðàñøèðåíèå àðñåíàëà èììóíîìîäóëèðóþùèõ ñðåäñòâ.
Èììóíîìîäóëèðóþùèå ñâîéñòâà èçó÷àëè íà ìûøàõ ëèíèé ÑÂÀ è Ñ57Â1/6 ïî ñïîñîáíîñòè âëèÿòü íà IgM àíòèòåëîîáðàçîâàíèå â ñåëåçåíêå in vivo (ÀÎÊ) è íà êóëüòóðå ëèìôîöèòîâ äîíîðîâ in vitro â òåñòàõ ñïîíòàííîé è ÔÃÀ ñòèìóëèðîâàííîé ïðîëèôåðàöèè ëèìôîöèòîâ.
Îïðåäåëåíèå êîëè÷åñòâà ÀÎÊ ê ýðèòðîöèòàì áàðàíà (ÝÁ) â ñåëåçåíêå ìûøåé (ëèíèè ÑÂÀ è Ñ57Â1/6 ñîîòâåòñòâåííî âûñîêî- è íèçêîîòâå÷àþùèå IgM àíòèòåëîîáðàçîâàíèåì íà ÝÁ) ïðîâîäèëè ñ ïðåïàðàòîì 3-íèòðîçî-4-ìåòèë-5-öèàíî-2,6-ïèðèäèíäèîëîì. Áûëè èñïîëüçîâàíû ñàìöû ëèíèè ÑÂÀ è Ñ57Â1/6 6-8-íåäåëüíîãî âîçðàñòà, ïîëó÷åííûå èç ïèòîìíèêà "Ñòîëáîâàÿ". Êîíòðîëüíàÿ è îïûòíàÿ ãðóïïû ñîñòàâëÿëèñü èç 10 æèâîòíûõ. Íèòðîçîïèðèäèíîë ââîäèëè ìûøàì Ñ57Â1/6 â îäíîé ñåðèè îäíîâðåìåííî ñ âíóòðèáðþøèííîé èììóíèçàöèåé ÝÁ (108 ÝÁ íà ìûøü) èíäóêòèâíàÿ ôàçà, à â äðóãîé ñåðèè íà 2-å ñóòêè ïîñëå èììóíèçàöèè ÝÁ ïðîäóêòèâíàÿ ôàçà. Äîçà ââîäèìîãî ïðåïàðàòà â äàííîé ñåðèè áûëà 20 ìã/êã ìàññû òåëà. Êîíòðîëüíûì æèâîòíûì ââîäèëè ôèçèîëîãè÷åñêèé ðàñòâîð.
Ìûøàì ëèíèè ÑÂÀ íèòðîçîïèðèäèíîë ââîäèëè â èíäóêòèâíóþ è ïðîäóêòèâíóþ ôàçû â äîçå 20 ìã/êã ìàññû òåëà, â äîçå 15 ìã/êã ìàññû òåëà â èíäóêòèâíóþ ôàçó è â äîçå 10 ìã/êã ìàññû òåëà â ïðîäóêòèâíóþ ôàçó. Æèâîòíûõ çàáèâàëè íà 5-å ñóòêè è îïðåäåëÿëè êîëè÷åñòâî àíòèòåëîîáðàçóþùèõ êëåòîê ïî ÷èñëó ãåìîëèòè÷åñêèõ áëÿøåê ìîäèôèöèðîâàííûì ìåòîäîì ëîêàëüíîãî ãåìîëèçà â ïîëóæèäêîé ñðåäå. Àíòèòåëîîáðàçóþùèå êëåòêè ðàñ÷èòûâàëè íà 106 êëåòîê ñåëåçåíêè.
Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 1.
Êàê âèäíî èç òàáë. 1, îäíîêðàòíîå âíóòðèáðþøèííîå ââåäåíèå 3-íèòðîçî-4-ìåòèë-5-öèàíî-2,6-ïèðèäèíäèîëà ìûøàì Ñ57Â1/6 è ÑÂÀ â äîçå 20 ìã/êã ìàññû òåëà îáíàðóæèâàåò îò÷åòëèâîå èììóíîäåïðåññèâíîå äåéñòâèå íà ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò íà òèìóñ çàâèñèìûé àíòèãåí ýðèòðîöèòû áàðàíà. Ñóïðåññîðíîå äåéñòâèå íèòðîçîïèðèäèíîëà áûëî áîëåå ñèëüíî âûðàæåíî ïðè ââåäåíèè ïðåïàðàòà â ïðîäóêòèâíóþ ôàçó èììóííîãî îòâåòà. Ó ìûøåé Ñ57Â1/6 â ïðîäóêòèâíóþ ôàçó èììóííûé îòâåò ñíèæàëñÿ íà 25% à ó ìûøåé ÑÂÀ ïðè àíàëîãè÷íîé äîçå èììóííûé îòâåò íà ýðèòðîöèòû áàðàíà îòìåíÿëñÿ ïîëíîñòüþ, ò.å. 3-íèòðîçî-4-ìåòèë-5-öèàíî-2,6-ïèðèäèíäèîë îáëàäàåò îò÷åòëèâûì èììóíîñóïðåññèâíûì äåéñòâèåì.
Ñïîíòàííóþ è ÔÃÀ ñòèìóëèðîâàííóþ ïðîëèôåðàöèþ ëèìôîöèòîâ ïîä âëèÿíèåì íèòðîçîïèðèäèíîëîâ èçó÷àëè íà ìîíîíóêëåàðíûõ êëåòêàõ (ÌÍÊ), âûäåëåííûõ èç ñòàáèëèçèðîâàííîé ÝÄÒÀ ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè çäîðîâûõ äîíîðîâ ñòàíöèè ïåðåëèâàíèÿ êðîâè ã. Íîâîñèáèðñêà â îäíîñòóïåí÷àòîì ãðàäèåíòå ïëîòíîñòè ôèêîëëà-âåðîãðàôèíà (ð 1,078 ã/ñì3). Âûäåëåííûå ÌÍÊ òðèæäû îòìûâàëè ñ ïåðåîñàæäåíèåì â çàáóôåðåííîì ôîñôàòàìè ôèçèîëîãè÷åñêîì ðàñòâîðå ñ 0,25%-íîé æåëàòèíîé. Èññëåäîâàëè âîçäåéñòâèå íèòðîçîïèðèäèíîëîâ íà ïðîëèôåðàòèâíóþ àêòèâíîñòü ÌÍÊ â ìîíîêóëüòóðå è â ðåàêöèè áëàñòíîé òðàíñôîðìàöèè â îòâåò íà ÐÍÀ S (Sîrva) â êîíöåíòðàöèè 5 ìêã/ìë.
Íèòðîçîïèðèäèíîëû 2,4-äèìåòèë-3-íèòðîçî-5-öèàíî-6-ïèðèäèíîë è 3-íèòðîçî-4-ìåòèë-5-öèàíî-2,6-ïèðèäèíäèîë âíîñèëè â êîíå÷íûõ êîíöåíòðàöèÿõ 0,2; 2; 20; 50; 100; 200 ìêã/ìë. ÌÍÊ êóëüòèâèðîâàëèñü (106 êëåòîê â ìë) â ñðåäå ÐÐÌ1-1640 (Flow Lab) ñ äîáàâëåíèåì 20%-íîé ïóëèðîâàííîé èíàêòèâèðîâàííîé ñûâîðîòêè ëþäåé À (IV) ãðóïïû, 2 ììîëü L-ãëþòàìèíà, 40 ìêã/ìë ãåíòàìèöèíà â òå÷åíèå 72 ÷ â àòìîñôåðå 5%-íîãî ÑÎ2 ïðè 37îÑ â 96-ëóíî÷íîì ïîëèñòèðîëîâîì ïëàíøåòå. Çà 18 ÷ äî îêîí÷àíèÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ â òåñò-ñèñòåìó äîáàâëÿëè 3Í-òèìèäèí (1 ìêÊè íà ëóíêó). Ïîñëå îêîí÷àíèÿ êóëüòèâèðîâàíèÿ ñîäåðæèìîå ëóíîê ñ ïîìîùüþ ñáîðíèêà êëåòîê Titertek ïåðåíîñèëè íà ôèëüòðû. Ïðîáû ïðîñ÷èòûâàëè íà -ñ÷åò÷èêå Multimat (Intertechnik). Ðàññ÷èòûâàëñÿ èíäåêñ âëèÿíèÿ (ÈÂ), ïðåäñòàâëÿþùèé îòíîøåíèå àáñîëþòíûõ öèôð âêëþ÷åíèÿ èçîòîïà â íóêëåîïðîòåèäíûå ôðàêöèè ÌÍÊ â ïðèñóòñòâèè íèòðîçîïèðèäèíîëîâ è áåç íèõ. Ðåçóëüòàòû ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 2.
Èçó÷åíèå èíäåêñà âëèÿíèÿ äëÿ 3-íèòðîçî-4-ìåòèë-5-öèàíî-2,6-ïèðèäèíäèîëà ïîêàçàëî, ÷òî èììóíîñóïðåññèâíûé ýôôåêò íèòðîçîïèðèäèíîëà ïðîÿâëÿåòñÿ óæå ïðè êîíöåíòðàöèè ïîñëåäíåãî â èíêóáàöèîííîé ñðåäå 20 ìêã/ìë. Ñïîíòàííàÿ ïðîëèôåðàöèÿ ïðè ýòîì ñíèæàåòñÿ íà 44% à ÐÍÀ-ñòèìóëèðîâàííàÿ íà 75% (Ð < 0,05). Ïðè êîíöåíòðàöèè 50 ìêã/ìë ñïîíòàííàÿ ïðîëèôåðàöèÿ ñíèæàëàñü íà 72% (Ð < 0,05), à ñòèìóëèðîâàííàÿ ÐÍÀ íà 79% (ð < 0,05). Áîëüøèå êîíöåíòðàöèè îêàçûâàëè àíàëîãè÷íûé ýôôåêò.
Èçó÷åíèå èíäåêñà âëèÿíèÿ 2,4-äèìåòèë-3-íèòðîçî-5-öèàíî-6-ïèðèäèíîëà âûÿâèëî íàëè÷èå èììóíîñóïðåññèâíîãî ýôôåêòà íà äîçå 2 ìêã/ìë â ñòèìóëèðîâàííîé ÐÍÀ êóëüòóðå. Ñ óâåëè÷åíèåì êîíöåíòðàöèè íèòðîçîïèðèäèíîëà â ñðåäå èíêóáàöèè ýôôåêò óñèëèâàëñÿ è íà÷èíàÿ ñ äîçû 50 ìêã/ìë ïðàêòè÷åñêè ïîëíîñòüþ óãíåòàë ïðîëèôåðàöèþ.  ñïîíòàííîé êóëüòóðå ñóïðåññîðíûé ýôôåêò ïðîÿâëÿëñÿ ñ äîçû 50 ìêã/ìë è âûøå.
Äëÿ èñêëþ÷åíèÿ ïðÿìîãî äåéñòâèÿ íèòðîçîïèðèäèíîëîâ íà ÐÍÀ áûëà ïðîâåäåíà ñåðèÿ èññëåäîâàíèé ñ èñïîëüçîâàíèåì ðåàêöèè ãåìàããëþòèíàöèè.
Èññëåäîâàíèå ïðîâîäèëîñü ñëåäóþùèì îáðàçîì.  ïîëèñòðîëüíûå ïëàíøåòû ñ ëóíêàìè âíîñèëèñü 2% -íàÿ ñóñïåíçèÿ ýðèòðîöèòîâ (0,1 ìë) è ÐÍÀ â êîíå÷íîé êîíöåíòðàöèè 5 ìêã/ìë.  ýòó òåñò-ñèñòåìó äóïëåòàìè äîáàâëÿëè íèòðîçîïèðèäèíîëû â ðàçâåäåíèÿõ îò 200 äî 0,2 ìêã/ìë. Ïëàíøåòû èíêóáèðîâàëè 120 ìèí ïðè êîìíàòíîé òåìïåðàòóðå è ó÷èòûâàëè ãåìàããëþòèíàöèþ ýðèòðîöèòîâ ïî ôîðìå îñàäêà. Ïðè íàëè÷èè àããëþòèíàöèè ýðèòðîöèòû ïîêðûâàþò âñå äíî ëóíêè. Îòñóòñòâèå àããëþòèíàöèè ýðèòðîöèòîâ ÷åòêî î÷åð÷åííûì ïÿòíîì â ñàìîé ëóíêå.
 ðåçóëüòàòå ïîñòàíîâêè ðåàêöèè ÃÀ ñ ïîñëåäîâàòåëüíûì ðàçâåäåíèåì íèòðîçîïèðèäèíîëîâ âûÿâëåíî, ÷òî ñòåïåíü ÃÀ â îïûòíûõ ëóíêàõ âèçóàëüíî íå îòëè÷àåòñÿ îò ñòåïåíè ÃÀ â êîíòðîëüíûõ ëóíêàõ.
Òàêèì îáðàçîì, ïðîâåäåííûå èññëåäîâàíèÿ ïîçâîëÿþò ñäåëàòü âûâîäû î íàëè÷èè ó íèòðîçîïèðèäèíîëîâ èììóíîñóïðåññèâíîãî ýôôåêòà, ÷òî ïîäòâåðæäàåòñÿ èõ äåéñòâèåì íà èìóííûé îòâåò íà ýðèòðîöèòû áàðàíà â ðåàêöèè ÀÎÊ è äåéñòâèåì íà ñïîíòàííóþ è ÐÍÀ èíäóöèðîâàííóþ ïðîëèôåðàöèþ ëèìôîöèòîâ. Îòðèöàòåëüíûå ðåçóëüòàòû, ïîëó÷åííûå â ðåàêöèè ãåìàããëþòèíàöèè ñ ðàçíûìè êîíöåíòðàöèÿìè íèòðîçîïèðèäèíîëîâ óêàçûâàþò íà ïðÿìîå äåéñòâèå èçó÷åííûõ ñîåäèíåíèé íà ïðîëèôåðàòèâíóþ àêòèâíîñòü ëèìôîöèòîâ è îòñóòñòâèå âëèÿíèÿ íà ÐÍÀ.
ÔÎÐÌÓËÀ ÈÇÎÁÐÅÒÅÍÈß
Ïðèìåíåíèå ïðîèçâîäíûõ íèòðîçîïèðèäèíîëîâ îáùåé ôîðìóëû
ãäå R ìåòèë, R îêñè èëè R ìåòèë, R ìåòèë,
è èõ êàëèåâûõ ñîëåé â êà÷åñòâå èììóíîäåïðåññàíòîâ â ýêñïåðèìåíòå.
Íåçàâèñèìûé íàó÷íî òåõíè÷åñêèé ïîðòàë
Íà ãëàâíóþ ñòðàíèöó ðàçäåëà
