СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ЛЕКАРСТВА В РАКОВУЮ КЛЕТКУ
(51) 6 A61K38/17, A61K38/17, A61K31:19, A61K31:335
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Статус: по данным на 10.08.2007 - прекратил действие
--------------------------------------------------------------------------------
(14) Дата публикации: 1997.11.27
(21) Регистрационный номер заявки: 96113903/14
(22) Дата подачи заявки: 1996.07.23
(45) Опубликовано: 1997.11.27
(56) Аналоги изобретения: RU, патент, 2026687, кл.A 61K 38/00, 1995.
(71) Имя заявителя: Акционерное общество закрытого типа "ФОСФОСОРБ"
(72) Имя изобретателя: Кулаев Д.В.; Насибов С.М.; Маркин С.С.; Бобков Ю.Г.; Семенов М.П.
(73) Имя патентообладателя: Акционерное общество закрытого типа "ФОСФОСОРБ"
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ЛЕКАРСТВА В РАКОВУЮ КЛЕТКУ
Использование: в области медицины. Сущность изобретения: смешивают обезжиренный раствор -фетопротеина в физиологическом растворе с противоопухолевым лекарственным веществом и арахидоновой кислотой, выдерживают смесь при 4oC0,5, фильтруют и замораживают. -фетопротеин предпочтительно выделяют из биологического материала путем 2-х ступенчатой афинной хроматографии на иммуносорбентах. 5 з.п. ф-лы, 1 табл.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к области медицины и в частности онкологии.
Известен способ получения препарата для направленной доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку, включающий измельчение абортивного материала человека, экстракцию бутиловым спиртом, диализ против 0,05 М раствора NaCl, концентрирование до содержания альфа-фетопротеина 100 Мкг/мг стерилизацию и прединкубацию стерилизованного продукта с 20 мг конъюгата доксорубицин-эстрон за 1-2 ч, до внутривенного введения препарата (патент RU N 2026688, A 61 K 38/00, 1995).
Недостатком способа является то, что известный препарат не подлежит хранению более 2 ч.
Известен также способ получения для направленной доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку, включающий смешение сыворотки из пуповинной крови человека, предварительно подвергнутой фильтрации, центрифугированию и стерилизации, с конъюгатом доксорубицинарахидоновая кислота, при этом смешение проводят из расчета до 8 мг альфа-фетопротеина сыворотки с 20 мг конъюгата за 1-2 ч до внутривенного введения (патент RU N 2026687, A 61 K 38/00, 1995).
Недостатком способа также является невозможность хранения препарата более 2 ч, а также недостаточная степень его чистоты.
Задача изобретения создание лекарственного средства высокой степени чистоты и подлежащего хранению длительное время.
Поставленная задача решается описываемым способом получения лекарственного средства для направленной доставки противоопухолевых лекарств в раковую клетку, включающим конъюгацию противоопухолевого лекарственного вещества с арахидоновой кислотой, смешение конъюгата с обезжиренным раствором альфа-фетопротеина в физиологическом растворе при массовом соотношении конъюгата к альфа-фетопротеину равном 1:(1-2), выдержку смеси при 4oC0,5, фильтрацию и замораживание.
При этом рекомендуется использовать альфа-фетопротеин, выделенный из абортальной или плацентарной сыворотки или пуповинной крови путем двух ступенчатой афинной хроматографии, вначале на иммуносорбенте с иммобилизованными моноспецифическими к альфа-фетопротеину антителами, а затем на сорбенте с иммобилизованными полиспецифическими антителами к балластным белкам.
Предпочтительно, выдерживать смесь при 4oC5 в течение 10-12 ч, или смесь замораживать и выдерживать для хранения до минус 30oC. В качестве противоопухолевых лекарственных веществ рекомендованы эпирубицин, адриамицин, доксорубицин.
Предпочтительно проводить конъюгацию противоопухолевых лекарственных веществ с арахидоновой кислотой при их мольном соотношении 1:(1-1,5).
Пример. Выделение альфа-фетопротеина (АФП) из абортальной или плацентарной сыворотки или пуповинной крови проводят следующим образом.
Сыворотку, например, абортальной крови подают на хроматографическую колонку, заполненную сефарозой с иммобилизованными кроличьими моноспецифическими к АФП антителами. Далее колонку элюируют раствором Na2CO3 и элюат подают на вторую хроматографическую колонку, заполненную софарозой иммобилизованной кроличьими полиспецифическими антителами к балластным белкам. Таким образом получают альфа-фетопротеин с 98%-ной чистотой.
Получение конъюгата противоопухолевого лекарственного вещества с арахидоновой кислотой проводят следующим образом.
Хлорангидрид арахидоновой кислоты растворяют в 1 мл сухого бензола, добавляют суспензию эпирубицина (1,5 моль) в том же растворителе и перемешивают встряхиванием в течение 6-8 ч при комнатной температуре.
Непрореагировавший эпирубицин экстрагируют 0,001 N раствором соляной кислоты. Органический слой отделяют на делительной воронке и упаривают на роторном испарителе и сушат под вакуумом до постоянного веса.
Получен конъюгат с мольным соотношением эпирубицин:арахидоновая кислота 1:1.
Получение комплекса конъюгата с АФП (альфа-фетопротеин). Один мг конъюгата суспендируют в 0,2 мл этанола, отбирают 20 мкл и прибавляют к предварительно обезжиренному раствору АФП (1 мг в 1 мл физраствора), тщательно перемешивают и оставляют на ночь при 4oC. Далее раствор фильтруют и замораживают для хранения (-30oC). Массовое соотношение конъюгата к АФП 1:1.
Аналогичным образом получены лекарственные средства: альфа-фетопротеин с конъюгатами арахидоновой кислоты с адриамицином, доксорубицином и некоторыми другими антрациклиновыми антибиотиками, имеющими первичную аминогруппу, при мольном отношении конъюгата к альфе-фетопротеину 1:1 и 1:2.
Все полученные средства отличаются высокой степенью чистоты не менее 99% поскольку предложенный способ предусматривает использование чистого альфа-фетопротеина (98% чистоты).
Срок хранения полученных лекарственных средств составляет не менее 1 мес, что позволяет избежать их приготовления за 1-2 ч перед введением.
Оценка цитотоксических эффектов полученных средств: конъюгатов альфа-фетопротеина с арахидоновой кислотой и некоторых из исследованных противоопухолевых лекарств проведена in vitro. В качестве модели использована культура клеток карциномы яичника человека (линия CaOv).
Соединение считают цитотоксичным при CE50 110-4 M. CE вычисляли методом проб и анализа.
Цитотоксическое действие лекарственных средств АФП с конъюгатами противоопухолевых лекарственных веществ и арахидоновой кислоты относительно клеток культуры карциномы яичника человека.
Из таблицы видно, что цитотоксичность лекарственных средств достаточно высока.
Проведено сравнение полученных препаратов с препаратами, полученными по способу-прототипу.
Обнаружено, что их цитототоксическая активность находится на одном уровне, CE50 110-9 M, однако, срок хранения средств, полученных предложенным способом значительно выше.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ получения лекарственного средства для направленной доставки противооопухолевого лекарственного вещества в раковую клетку, включающий конъюгацию противоопухолевого лекарственного вещества с арахидоновой кислотой и смешение полученного конъюгата с раствором, содержащим альфа-фетопротеин, отличающийся тем, что на смешение подают обезжиренный раствор альфа-фетопротеина в физиологическом растворе при массовом соотношении конъюгата и альфа-фетопротеина 1 1 2, после смешения смесь выдерживают при 4 0,5oC, фильтруют и замораживают.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют альфа-фетопротеин, выделенный из абортальной или плацентарной сыворотки или пуповинной крови путем двуухступенчатой аффинной хроматографии сначала на иммуносорбенте с иммобилизованными моноспецифическими к альфа-фетопротеину антителами, а затем на иммунносорбенте с иммобилизованными полиспецифическими антителами к балластным белкам.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что смесь выдерживают при (4 5)oC в течение 10 12 ч.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что смесь замораживают до -30oС и выдерживают при данной температуре.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве противоопухолевого лекарственного вещества используют эпирубицин, или адриамицин, или доксорубицин.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что конъюгацию противоопухолевого лекарственного вещества с арахидоновой кислотой проводят при их молярном соотношении 1 1 1,5.
Независимый научно технический портал
На главную страницу раздела
