СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА
(51) 7 A61K39/04
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Статус: по данным на 29.08.2007 - действует
--------------------------------------------------------------------------------
Документ: В формате PDF
(14) Дата публикации: 2005.12.27
(21) Регистрационный номер заявки: 2004111058/13
(22) Дата подачи заявки: 2004.04.12
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2004.04.12
(45) Опубликовано: 2005.12.27
(56) Аналоги изобретения: RU 2146533 C1, 20.03.2000. RU 2001116681 А, 27.05.2003. ЯБЛОКОВА Т.Б., Противотуберкулезная вакцинация, в кн. Иммунология и иммунопатология туберкулеза, М., Медицина, 1976, с.248-266. Ветеринарное законодательство, М., Колос, 1981, т.3, с.217.
(72) Имя изобретателя: Бажин М.А. (RU); Ощепков В.Г. (RU); Новиков А.Н. (RU); Власенко В.С. (RU); Темиркалин Т.Т. (RU)
(73) Имя патентообладателя: Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных (ВНИИБТЖ) (RU)
(98) Адрес для переписки: 644001, г.Омск, ул. Лермонтова, 93,ВНИИБТЖ
(54) СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА
Изобретение относится к ветеринарной иммунологии. Способ включает иммунизацию животных в возрасте 10-20 суток вакциной БЦЖ, исследование аллергической туберкулиновой пробой и реиммунизацию в возрасте 14-16 месяцев вакциной БЦЖ. Затем через каждые 12 месяцев животных реиммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 подкожно в дозе 5-7 мг белка на одно животное до оздоровления фермы (хозяйства). Исследования на туберкулез проводят через 6 месяцев. Способ позволяет создавать у животных перманентный протективный иммунитет, за счет чего возможно повысить профилактический эффект в 1,5-2 раза. 6 табл.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к ветеринарной иммунологии, в частности к способу специфической профилактики, и может быть использован для профилактики и оздоровления животноводческих ферм от туберкулеза.
Известен способ профилактики туберкулеза молодняка крупного рогатого скота (патент РФ №2146533, кл. А 61 К 39/04, 31/115; В.Н.Ласкавый, Э.Д.Лакман, 20.03.2000), который предусматривает введение телятам в возрасте от 1 до 10 суток внутримышечно в область крупа по 3-4 мл туберкулина и через 30-40 минут таким же способом вводят по 4-5 мл препарата, содержащего в качестве основного начала формальдегид, а в качестве целевых добавок NaCl и дистиллированную воду. Оба препарата вводят однократно и внутримышечно.
Недостатком данного способа является то, что такого рода иммунизация не создает у телят длительного противотуберкулезного иммунитета и поэтому в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах молодняк старших возрастов и коровы будут не защищены от туберкулеза.
Известен также способ профилактики туберкулеза животных (патент СССР №1790414, кл. А 61 К 39/04; А.С.Донченко с соавт., 23.01.93. Бюл. №3), который предусматривает иммунизацию животных вакциной БЦЖ с иммуномодулятором (высокомолекулярная РНК из дрожжей), затем иммуномодулятор вводят повторно без вакцины БЦЖ через 13-15 дней в том же количестве (0,5-50 мг/кг).
Недостатком данного способа является то, что использование для иммунизации иммуномодулятора повышает не только иммуногенные, но и усиливает реактогенные свойства вакцины БЦЖ, что снижает продолжительность протективного иммунитета у животных. Следовательно, известный способ профилактики длительно не защищает животных от заболевания туберкулезом.
Известен также способ специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота в неблагополучных хозяйствах с помощью вакцины БЦЖ (Наставление по применению вакцины БЦЖ при туберкулезе крупного рогатого скота, 26.02.1990 г.), согласно которому вакциной БЦЖ прививают телят однократно в возрасте 10-20 дней. Это позволяет сократить сроки оздоровления ферм с меньшими материальными затратами. Однако известный способ профилактики туберкулеза защищает животных в течение только одного года.
В ряде хозяйств течение туберкулеза приобретает длительный, стационарный характер. Эпизоотический процесс туберкулеза в таких хозяйствах становится неуправляемым и оздоровление их методом систематических аллергических исследований, как правило, не достигается. Это явилось основанием для использования радикального метода оздоровления - путем полной одномоментной замены неблагополучного поголовья здоровым (Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных // Сб. санитарных и ветеринарных правил. - М., 1996). Подготовка неблагополучной фермы для размещения здорового скота требует выполнения большого объема работ по санации помещений и территорий, что сопровождается большими материальными затратами.
Задачей изобретения является повышение эффективности профилактики туберкулеза путем создания у животных перманентного (непрерывного) иммунитета против туберкулеза.
Способ профилактики осуществляется иммунизацией вакциной БЦЖ телят в возрасте до 20 суток, реиммунизацией вакциной БЦЖ телок в возрасте 14-16 месяцев, затем нереагирующих животных на ППД-туберкулин дополнительно иммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 в дозе 5-7 мг белка на одно животное. Последующие реиммунизации вакциной ТБЦ-2 проводят через каждые 12 месяцев в течение 4-6 лет (время возможной реинфекции). Коров, ревакцинированных ТБЦ-2, исследуют аллергической туберкулиновой пробой через каждые 6 месяцев.
Противотуберкулезная бесклеточная вакцина ТБЦ-2 - новый тип неживой бесклеточной (молекулярной) вакцины. Способ получения вакцины включает культивирование микобактерий из штамма БЦЖ, выделение 2 фракций - цитоплазматической и фракции клеточных оболочек. Фракцию клеточных оболочек конъюгируют на целлюлозной матрице в присутствии треххлористого хрома, затем добавляют цитоплазматическую фракцию. Испытание препарата на лабораторных животных и молодняке крупного рогатого скота показало, что вакцина нового типа обладает высокой иммуногенностью (патент 2217164, МПК А 61 К 39/04 от 27.11.2003, бюл. №33).
Пример 1. Для опыта отобрали 20 телок и в возрасте 10-20 дней, привили вакциной БЦЖ в кожу шеи по 1 мг (1-я группа). Для контроля также отобрали 20 телок в возрасте до 20-ти дней, которым вакцину БЦЖ не вводили (2-я группа).
Затем через 45 дней после иммунизации телят обеих групп исследовали на туберкулез с помощью однократной ППД-туберкулиновой пробы, больными считают среди привитых животных по утолщению кожной складки на 15 мм и выше (патент №1829929, МПК А 61 В 10/00 от 23.07.93, бюл №27) и среди непривитых телят по утолщению кожной складки на 3 мм и выше (Наставление по применению (ППД) туберкулинов для млекопитающих и птиц. Утверждено Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ от 16.02.1999 года).
С целью оценки иммунного статуса в периферической крови животных опытных групп определили число иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (иммунологические параметры). Реакцией спонтанного розеткообразования (Е-рок) определили количество Т-лимфоцитов; реакцией непрямого глобулинового розеткообразования (ЕА-рок) - клетки-киллеры; комплементарным розеткообразованием (ЕАС-рок) - В-лимфоциты; лимфоциты, реагирующие с антигенами микобактерий с помощью розеткообразования (ЕТ-рок) с эритроцитами быка, адсорбировавшими туберкулин. Подсчет лейкоцитов и лейкограмм проводили по общепринятым методикам.
Далее иммунологические параметры исследовали дискретно-динамическим методом, который автоматизирован специальной программой для ЭВМ (заявка на выдачу патента №00669275 от 21.01.2003 г.). По результатам этих исследований составлены дифференциально-прогностические таблицы, позволяющие оценить иммунный статус животных, привитых противотуберкулезными препаратами.
В результате исследований установили (табл.1) высокую активность иммунокомпетентных клеток у 75% животных через 5 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, у 40% животных через 12 месяцев (табл.2) и у 35% животных через 14 месяцев (табл.3).
Результаты этих исследований убеждают о необходимости проведения реиммунизаций телок в возрасте 14 месяцев вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 1 мг на одно животное.
Иммунный статус у животных после ревакцинации определяли также с помощью дискретно-динамического анализа. Установили у 70% животных (табл.4) повышенную активность иммунокомпетентных клеток через 6 месяцев и у 25% животных через 14 месяцев после ревакцинации.
Последующую реиммунизацию коров опытной группы провели через 14 месяцев бесклеточной вакциной ТБЦ-2. Перед реиммунизацией животных исследовали туберкулиновой аллергической пробой и установили, что у всех коров кожная реакция на ППД-туберкулин отсутствовала. Коровам опытной группы вакцину ТБЦ-2 ввели подкожно в дозе 6 мг белка на одно животное.
Через 6 месяцев после введения вакцины ТБЦ-2 животных исследовали туберкулиновой аллергической пробой и оценку иммунного статуса коров провели дискретно-динамическим анализом. Туберкулиновой аллергической реакции у коров не обнаружено. Иммунный статус коров, реиммунизированных вакциной ТБЦ-2, описан в таблице 5, где у 12 из 20 коров (60%) установили повышенную активность иммунокомпетентных клеток.
Аналогичные исследования коров проведены через 9 месяцев после реиммунизации вакциной ТБЦ-2. Животных, реагирующих на ППД-туберкулин, не выявлено, оценка иммунного статуса коров показана в дифференциально-прогностической таблице 6.
Таким образом, в эксперименте разработана схема вакцинации крупного рогатого скота, позволяющая создавать у животных перманентный протективный иммунитет, этим самым повысить профилактический эффект в 1,5-2 раза.
Пример 2. Производственное испытание схемы вакцинации крупного рогатого скота провели в ОПХ СибМИС Таврического района Омской области.
В хозяйстве по причине туберкулеза в 1999 году поголовье крупного рогатого скота сдали на убой. После проведения санитарных мероприятий в одно из подготовленных помещений разместили 144 телки в возрасте 14-16 месяцев из благополучных по туберкулезу ферм. При исследовании на туберкулез по всей группе дважды получили отрицательный результат. При исследовании через 4 месяца после завоза выделили 18 животных, реагирующих на туберкулин. Провели диагностический убой животных и у двух патологоанатомическим исследованием установили туберкулез.
Затем дважды двойной туберкулиновой пробой исследовали оставшихся животных, отделили реагирующих на ППД-туберкулин и нереагирующих животных привили вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 1 мг на одно животное.
Через 14 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ коров исследовали туберкулиновой аллергической пробой и установили, что у всех животных реакция отсутствовала. Также дискретно-динамическим анализом иммунологических параметров было установлено уменьшенное число взаимосвязей в системе иммунитета, что явилось основанием провести реиммунизацию коров бесклеточной вакциной ТБЦ-2. Коров через 6 и 12 месяцев после реиммунизации исследовали аллергической реакцией и установили, что все животные не реагируют на ППД-туберкулин.
Следовательно, реиммунизация вакциной ТБЦ-2 предохраняет животных от заболевания туберкулезом и позволяет контролировать стадо крупного рогатого скота на туберкулез аллергической реакцией 2 раза в год (через 6 месяцев после ревакцинации). В последующем по результатам дискретно-динамического анализа ревакцинацию провели еще дважды с интервалом 12 месяцев, что позволило в условиях неблагополучной по туберкулезу крупного рогатого скота ферме сохранить благополучие стада более 3 лет (срок наблюдения), предотвратить экономический ущерб только за один год на сумму 432 тыс. рублей.
В дальнейшем родившихся телят от коров данного стада иммунизируют вакциной БЦЖ в возрасте 10-20 дней, затем через 30-45 дней после иммунизации их дополнительно исследуют на туберкулез с помощью однократной туберкулиновой пробы, нереагирующих телят допрививают, реагирующих по увеличению кожной складки до 15 мм и более изолируют, после откорма сдают на убой. Из вакцинированного молодняка комплектуют отдельные группы по полу и возрасту и содержат обособленно. Повторное исследование однократной туберкулиновой пробой привитого молодняка проводят через 14 месяцев, реагирующих сдают на убой, нереагирующих телок формируют в отдельное стадо (телки перед осеменением) и ревакцинируют БЦЖ. В дальнейшем с этими животными поступают как описано ранее.
Последующие вакцинации коров ТБЦ-2 проводят ежегодно в течение 4-6 лет (время возможной реинфекции) после оздоровления хозяйства (фермы) от туберкулеза. Исследование коров на туберкулез проводят 2 раза в год через 6 месяцев. Из числа реагирующих отбирают 2-3 коровы для проведения контрольно-диагностического убоя.
Таблица 1
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 5 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл
№ п/п Сочетание, вариабельный параметр (базис) Интактные Привитые
n t-критерий по Стьюденту вариабельный базис n t-критерий по Стьюденту вариабельный базис
1 В-лимфоциты (Т-киллеры) 20 3,46 0,71 0,65 20 2,55 0,29 0,46
2 Т-киллеры (лейкоциты) 2,92 1,21 6,65
3 Антигенреактивные лимфоциты (лейкоциты) 2,50 0,73 6,65
4 Лейкоциты (В-лимфоциты) 2,42 6,20 1,05
5 В - (Т-лимфоциты) 2,29 0,76 1,01
6 Лейкоциты (Т-киллеры) 2,27 6,20 0,65
7 Т-лимфоциты (лейкоциты) 4,29 0,80 6,20
8 Т-лимфоциты (нейтрофилы) 3,63 0,53 1,10
9 Лимфоциты (нейтрофилы) 2,89 3,26 1,10
10 Антигенреактивные лимфоциты (Т-киллеры) 2,82 0,28 0,46
11 Нейтрофилы (лимфоциты) 2,72 1,03 3,38
12 Лейкоциты (Т-лимфоциты) 2,58 5,13 0,64
13 В - (антигенреактивные лимфоциты) 2,49 0,64 0,42
14 Нейтрофилы (Т-лимфоциты) 2,20 0,94 0,64
Количество иммунных животных 7 35% 15 75%
Таблица 2
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 12 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл
№ п/п Сочетание, вариабельный параметр (базис) Интактные Привитые
n t-критерий по Стьюденту вариабельный базис n t-критерий по Стьюденту вариабельный базис
1 Антигенреактивные-(В-лимфоциты) 20 3,31 0,12 1,85 20
2 Лейкоциты (В-лимфоциты) 4,26 6,92 1,85
3 Лейкоциты (Т-киллеры) 2,75 6,23 0,99 3,08 >=10,4 >=2,12
4 Т-киллеры (лейкоциты) 3,14 >=2,22 >=8,50
Количество иммунных животных 6 30% 8 40%
Таблица 3
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок через 14 месяцев после иммунизации вакциной БЦЖ, тыс/мкл
№ п/п Сочетание, вариабельный параметр (базис) Интактные Привитые
n t-критерий по Стьюденту вариабельный базис n t-критерий по Стьюденту вариабельный базис
1 Е- (лейкоциты) 20 3,20 2,02 7,30 20
2 ЕТ- (нейтрофилы) 2,17 1,26 1,55
3 Т-киллеры (Т-лимфоциты) 3,30 1,41 1,17
4 В-лимфоциты (Т-киллеры) 2,44 1,06 1,64
5 В- (Т-лимфоциты) 2,23 1,14 1,17
Количество иммунных животных 6 30% 7 35%
Таблица 4
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у телок и нетелей, привитых вакциной БЦЖ, тыс/мкл
Через 6 месяцев после вакцинации Через 14 месяцев после вакцинации
№ п/п Сочетание, вариабельный параметр (базис) n t-критерий по Стьюденту вариабельный Базис n t-критерий по Стьюденту вариабельный Базис
1 Т-лимфоциты (лейкоциты) 20 2,71 0,90 6,40 20 4,56 0,79 7,80
2 Лейкоциты (Т-лимфоциты) 4,29 8,10 1,30 2,73 7,93 0,69
3 Нейтрофилы (Т-киллеры) 2.55 1,50 0,61
4 Лейкоциты (Т-киллеры) 4,29 8,10 1,14 2,44 8,38 0,61
Количество иммунных животных 14 70% 5 25%
Таблица 5
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у коров через 6 месяцев после ревакцинации ТБЦ-2, тыс/мкл
№ п/п Сочетание, вариабельный параметр (базис) n t-критерий по Стьюденту Вариабельный Базис
1 В - (Т-лимфоциты) 20 5,00 0,42 0,36
2 Т-киллеры (лейкоциты) 4,50 1,07 4,90
3 Антигенреактивные (В-лимфоциты) 4,45 0,10 0,44
4 Лейкоциты (Т-киллеры) 4,11 4,87 1,14
5 Антигенреактивные (Т-лимфоциты) 3.80 0,08 0,36
6 Лейкоциты (Т-лимфоциты) 3,76 4,87 0,36
7 Т-лимфоциты (антигенреактивные) 3,46 0,40 0,07
8 Т-лимфоциты (Т-киллеры) 3,37 0,47 1,14
9 Т-киллеры (Т-лимфоциты) 3,35 1,16 0,36
10 Т-лимфоциты (лейкоциты) 3,30 0,40 4,90
11 Лейкоциты (В-лимфоциты) 3,17 5,00 0,44
12 Т - (В-лимфоциты) 3,13 0,42 0,44
13 В-лимфоциты (лейкоциты) 2,60 0,51 4,90
14 Лейкоциты (антигенреактивные) 2,53 4,90 0,07
15 В-лимфоциты (антигенреактивные) 2,51 0,45 0,07
16 Т-киллеры (антигенреактивные) 2,41 1,07 0,07
17 В-лимфоциты (Т-киллеры) 2,38 0,59 1,14
18 Т-киллеры (В-лимфоциты) 2,37 1,26 0,44
19 Антигенреактивные (нейтрофилы) 2,36 0,13 0,68
20 Антигенреактивные (лейкоциты) 2,30 0,09 4,90
21 Нейтрофилы (В-лимфоциты) 2,24 0,80 0,44
Количество иммунных животных 12 60%
Таблица 6
Дифференциально-прогностическая таблица по оценке иммунного статуса у коров через 9 месяцев после ревакцинации ТБЦ-2, тыс/мкл
№ п/п Сочетание, вариабельный параметр (базис) n t-критерий по Стьюденту Вариабельный Базис
1 Т-лимфоциты (лейкоциты) 20 5,56 0 53 4,70
2 В-лимфоциты (лейкоциты) 3,48 0,46 4,70
3 Т - (В-лимфоциты) 3,26 0,60 0,49
4 Лейкоциты (Т-лимфоциты) 3,25 4,82 0,51
5 Лейкоциты (В-лимфоциты) 3,15 4,83 0,49
6 Лейкоциты (Т-киллеры) 2,57 4,90 0,97
7 В - (Т-лимфоциты) 2,57 0,43 0,51
8 В-лимфоциты (Т-киллеры) 2,27 0,44 0,97
9 В-лимфоциты (антигенреактивные) 2,23 0, 54 0,30
Количество иммунных животных 9 45%
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ профилактики туберкулеза, включающий иммунизацию животных в возрасте 10-20 суток вакциной БЦЖ, затем исследование аллергической туберкулиновой пробой и реиммунизацию в возрасте 14-16 месяцев вакциной БЦЖ, отличающийся тем, что затем через 12 месяцев не реагирующих на туберкулин животных реиммунизируют противотуберкулезной бесклеточной вакциной ТБЦ-2 подкожно в дозе 5-7 мг белка на одно животное, после чего реиммунизацию вакциной ТБЦ-2 проводят через каждые 12 месяцев до оздоровления фермы (хозяйства), а исследования на туберкулез проводят через 6 месяцев.
Независимый научно технический портал
На главную страницу раздела
