СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЯ ИММУННОГО СТАТУСА
(51) 7 G01N33/53
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Статус: по данным на 18.07.2007 - действует
--------------------------------------------------------------------------------
Документ: В формате PDF
(14) Дата публикации: 2005.02.27
(21) Регистрационный номер заявки: 2002134063/15
(22) Дата подачи заявки: 2002.12.18
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2002.12.18
(43) Дата публикации заявки: 2004.07.20
(45) Опубликовано: 2005.02.27
(56) Аналоги изобретения: Д.К.Новиков, В.И.Новикова. Оценка иммунного статуса. - Москва-Витебск, 1996, с.54, 57. А.М.Земсков. Перспективные подходы к оценке иммунного статуса человека. Лабораторное дело. 1986, с. 544-546. Иммунологические методы исследования. - М.: Мир, 1988, с. 489-503.
(72) Имя изобретателя: Шойбонов Б.Б. (RU); Хайбулин В.Р. (RU); Сониев В.М. (RU); Онтобоев А.Н. (RU); Зинченко А.А. (RU); Алёшкин В.А. (RU)
(73) Имя патентообладателя: Государственное учреждение "Московский научно- исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского Министерства здравоохранения Российской Федерации" (RU)
(98) Адрес для переписки: 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, 10, ГУ "МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского МЗ России", патентный отд.
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЯ ИММУННОГО СТАТУСА
Изобретение относится к области медицинской иммунологии и может быть использовано для определения нарушения иммунного статуса человека. Сущность изобретения заключается в определении в сыворотке крови человека титра гетерофильных антител по методу Пауля-Буннелля, относительного уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), комплементактивирующих свойств гетерофильных антител путем инкубации стандартизированных эритроцитов барана в течение 30±5 мин с 0,8% сывороткой и с последующим измерением степени лизиса эритроцитов. Затем проводят расчет коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител по системе комплемента (КЭФГА-СК) по формуле: КЭФГА-СК=У/ТГА, где У – степень лизиса, %, ТГА – обратный титр гетерофильных антител к эритроцитам барана, а определение нарушения иммунного статуса проводят путем сопоставления коэффициента с относительным уровнем содержания ЦИК в сыворотке. Технический результат - выявление и доклинических форм иммунодефицита, и аутоиммунных заболеваний, что открывает возможность для профилактики их на самых ранних стадиях развития. 5 табл.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской иммунологии, и может быть использовано для определения нарушения иммунного статуса человека путем сопоставлении коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител с относительным уровнем содержания циркулирующих иммунных комплексов.
Основная, первичная функция антител - связывание с антигеном, в некоторых случаях оно непосредственно ведет к достижению эффекта, обеспечивая нейтрализацию бактериального токсина или предотвращая проникновение вируса в клетки. Однако чаще взаимодействие антител с антигеном остается безрезультатным, пока они не осуществят свои вторичные, “эффекторные” функции [1].
К одной из эффекторных функций иммуноглобулинов относится их избирательное взаимодействие с различными типами клеток (мононуклеары, нейтрофилы, тучные клетки, базофилы) при участии специальных рецепторов клеточной поверхности (FcR) [1].
Другой важной эффекторной функцией IgM, IgG1, IgG2 и IgG3 после связывания с антигеном является активация классического пути системы комплемента (СК) [2]. Альтернативный и лектиновый пути активируются иммунными комплексами (ИК), содержащими IgA [3].
Система комплемента является частью иммунной системы и состоит из многих компонентов, которые действуют каскадным механизмом. Эта система играет ключевую роль как в клиренсе ИК, так и в иммунном ответе на инфекционные агенты, чужеродные антигены, опухолевые и вирус-инфицированные клетки.
Система комплемента может активироваться тремя путями (классический, альтернативный и лектиновый).
Классический путь является Са2+ /Мg2+ - зависимым каскадом, который в норме активируется при формировании ИК. С1, первый ферментный комплекс в каскаде, является пентамолекулярным комплексом. Включает одну молекулу C1q и по две молекулы С1r и С1s. C1 компонент связывается с Fc-фрагментом иммуноглобулинов в ИК через C1q домен и инициирует ферментативный каскад комплемента. Как только активируется C1, С1s расщепляет компонент С4, приводя к образованию С4b, который затем связывает С2. Иммобилизованный компонент С2 расщепляется при помощи фермента С1s с образованием С3-конвертазы (С4b, С2а) классического пути.
Альтернативный путь является Mg2+ - зависимым и активируется рядом разнообразных веществ, включающих полисахариды клеточных стенок дрожжей и бактерий, определенные биополимерные материалы. При иммобилизации С3b на поверхности на него садится фактор В, который расщепляется фактором D и образуется С3-конвертаза (С3b, Bb) альтернативного пути.
Лектиновый путь активирует комплемент при помощи маннан-связывающего лектина (MBL) через две сывороточные протеазы (MASP-1 и MASP-2) (подобно с С1r и C1s в классическом пути активации комплемента). MBL связывается с клеточными стенками патогенов, содержащих маннозу. Как и в классическом пути активации комплемента, для пектинового пути также требуются компоненты С4 и С2. Активация лектинового пути приводит к формированию С3-конвертазы, аналогичной с С3-конвертазой классического пути (C4b, C2a) [1].
Субстратом С3-конвертазы трех путей является ключевой компонент комплемента С3, при гидролизе которого образуются С3а и С3b. Присоединяя дополнительно молекулу С3b, С3-конвертаза обретает способность гидролизовывать компонент С5, который запускает реакцию формирования мембраноатакующего комплекса (МАК).
При активации комплемента генерируются биологически активные фрагменты белков С3, С4 и С5 (С3а, С4а и С5а-анафилатоксины) и С5b-9 (МАК), которые опосредуют воспалительные активности, включающие лейкоцитарный хемотаксис, активацию макрофагов, нейтрофилов и тромбоцитов, тучных и эндотелиальных клеток, повышение сосудистой проницаемости, цитолиз и тканевое повреждение [4].
Дефицит компонентов классического пути активации комплемента –C1q, C1r и C1s, С4 или С2 - вызывает предрасположенность к заболеваниям, обусловленным нарушениями в формировании и клиренсе ИК, например к возникновению системной красной волчанки (СКВ). Также показано, что у больных с СКВ вдвое снижено количество рецепторов для С3b (CR1) на эритроцитах и лейкоцитах [1]. CR1 и Fc-рецепторы кооперируются для связывания и фагоцитоза опсонизированных частиц.
Недостаточность комплемента составляет не более 2% всех первичных иммунодефицитов, проявляется нарушением опсонизации, фагоцитоза и разрушения микроорганизмов и сопровождается тяжелыми инфекциями, вплоть до сепсиса [5].
Для исследования системы комплемента определяют его гемолитическую активность. Суть метода заключается в следующем: 1) разные разведения исследуемой сыворотки добавляют к эритроцитам барана, сенсибилизированным антителами кролика (ЕАк); 2) степень гемолиза оценивают фотометрически по выходу гемоглобина в раствор. Активность комплемента выражают в гемолитических единицах. За одну 50% гемолитическую единицу комплемента (СН50) принимают такое его количество, которое вызывает гемолиз 50% 0,5 мл стандартной суспензии ЕА при 37°С за 45 мин. В мл сыворотки здоровых доноров обычно содержится 20-40 СН50 [6].
Однако существенным недостатком этого метода является использование анти-Форсмановских антител кролика для сенсибилизации эритроцитов барана, что ограничивает тест только гемолитической активностью комплемента. С этой точки зрения понятен интерес к способам определения эффекторной функции человеческих иммуноглобулинов, в частности по способности к активации собственного комплемента по классическому пути.
Существует метод определения титра гетерофильных антител (ГА) к эритроцитам барана с помощью реакции гемагглютинации при лабораторной диагностике инфекционного мононуклеоза (ИМ) (проба Пауля-Буннелля). ГА представляют собой IgM, взаимодействующие с антигенами животных неродственных видов, например барана или быка. Эти антитела выявляются примерно у 90% больных ИМ. ГА в низком титре могут присутствовать и у здоровых людей. ГА при ИМ отличаются от ГА, присутствующих в сыворотке здоровых и больных сывороточной болезнью, по способности абсорбироваться тканью почек морской свинки и эритроцитами быка. Диагностически значимым считается титр 1:128-1:256. Кроме инфекционного мононуклеоза проба бывает положительной при лейкозах, вирусных гепатитах, цитомегаловирусной инфекции, лимфоме Беркитта, ревматоидном артрите и после введения иммунных сывороток [5].
Однако проба Пауля-Буннелля характеризует способность ГА к гемагглютинации, но не отражает одну из эффекторных функций гетерофильных антител - способность активировать систему комплемента.
Таким образом, на настоящий момент не существует способа определения нарушений иммунного статуса, включающего комплексный анализ титра гетерофильных антител, их комплементактивирующих свойств и относительного уровня циркулирующих иммунных комплексов.
Задачей настоящего изобретения является расширение ассортимента способов лабораторной диагностики иммунодефицитов, аутоиммунных и аллергических заболеваний, злокачественных новообразований.
Поставленная задача решается путем забора крови у пациента, получения из нее сыворотки и определения в сыворотке крови сначала титра гетерофильных антител по методу Пауля-Буннелля, затем относительного уровня циркулирующих иммунных комплексов методом преципитации ПЭГ 6000 и комплементактивирующих свойств гетерофильных антител путем инкубации стандартизированных эритроцитов барана (1,5×108 кл/мл) при температуре 37±0,5°С в течение 30±5 мин с 0,8% сывороткой и с последующим измерением степени лизиса, после чего проводят расчет коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител по системе комплемента (KЭФГА-СК) по формуле:
КЭФГА-СК=У/TГА,
где У - степень лизиса, %, ТГА - обратный титр гетерофильных антител к эритроцитам барана, по величине коэффициента относят к группе исследуемых с высоким более 13, или повышенным от 6 до 13, или нормальным от 5 до 6, или пониженным от 1,8 до 4,5, или низким ниже 1,8 коэффициентом, а определение нарушений иммунного статуса проводят путем сопоставления коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител с относительным уровнем содержания циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке.
Разработанный способ включает забор крови, приготовление сыворотки, определение комплементактивирующей способности гетерофильных антител (ГА) в сыворотке по лизису эритроцитов барана, определение содержания иммуноглобулинов (IgG, IgA, IgM), определение титра ГА (проба Пауля-Буннелля), расчет коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител по системе комплемента, определение относительного уровня содержания циркулирующих иммунных комплексов и сопоставление ее с КЭФГА-СК выявляет нарушения иммунного статуса человека.
Таким образом, технический результат, получаемый при реализации изобретения, заключается в углубленном исследовании не только клинически выраженных форм иммунологической недостаточности, но и доклинических форм иммунодефицита, аутоиммунных заболеваний, что открывает возможность для профилактики на самых ранних стадиях развития заболеваний, обусловленных сдвигами в эффекторной функции гетерофильных антител, в частности, и иммуноглобулинов, в целом, приводящих в конечном итоге к нарушениям солюбилизации и элиминации циркулирующих иммунных комплексов.
Пример. Способ определения нарушения иммунного статуса человека включает забор крови, приготовление сыворотки и поэтапное определение титра гетерофильных антител к эритроцитам барана, коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител по активации системы комплемента и сопоставление коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител по системе комплемента с относительным уровнем содержания циркулирующих иммунных комплексов.
Этап 1. Определение титра гетерофильных антител к эритроцитам барана.
Реакцию гемагглютинации (РГА) ставили в стандартных пластиковых 96-луночных микроплашках с круглодонными лунками.
Эксперименты были проведены следующим образом. Во все лунки вносили по 40 мкл 0,15 М раствора NaCl и готовили серии двукратных разведений сывороток. Затем во все лунки вносили по 40 мкл стандартизированной суспензии эритроцитов барана (1,5×10 8 кл/мл) и перемешивали содержимое лунок путем осторожного встряхивания панели в горизонтальной плоскости. Панель, прикрытую сверху стеклянной пластинкой, выдерживают 30 мин при 37°С. Результаты реакции учитывали невооруженным глазом, определяли последнее разведение сыворотки, в котором еще произошла гемагглютинация. Контроль эритроцитов не содержал сыворотки. Проведенная проба Пауля-Буннелля выявила наличие во всех исследованных сыворотках гетерофильных антител. Результаты пробы Пауля-Буннелля представлены в табл.1.
Средний титр ГА к эритроцитам барана составил 1:21,50±17,86, т.е. колебания составили от 1:2 до 1:64. По содержанию ГА исследованные сыворотки были разбиты на группы:
1 группа (низкое содержание ГА от 1:2 до 1:8) включает сыворотки 1, 3, 4, 7, 10, 15;
Таблица 1
Титры гетерофильных антител к эритроцитам барана в сыворотке крови
№ сыворотки Титр ГА(1:..)
1 2
2 16
3 2
4 2
5 64
6 16
7 8
8 16
9 32
10 8
11 16
12 64
13 16
14 32
15 8
16 32
17 32
18 16
19 16
20 32
2 группа (среднее содержание - титр 1:16) - сыворотки 2, 6, 8, 11, 13, 18, 19;
3 группа (повышенное - титр 1:32) - сыворотки 9, 14, 16, 17, 20;
4 группа (высокое содержание - титр 1:64) включает сыворотки 5 и 12.
Таким образом, определение титра ГА к эритроцитам барана (проба Пауля-Буннелля) является довольно информативным тестом, так как у одной женщины из 4 группы был ранее выставлен диагноз “ревматоидный полиартрит” (сыворотка №5) и наблюдались клинические признаки данного заболевания.
Этап 2. Определение коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител по активации системы комплемента (КЭФГА-СК).
200 мкл суспензии эритроцитов (Б) (1,5×108 кл/мл) инкубировали с разбавленной сывороткой крови человека в общем объеме 500 мкл, доведенном буфером VBS2+ (концентрация сыворотки 0,8%). Одновременно ставили контроль на спонтанный (200 мкл Е+300 мкл VBS2+) и полный лизис Е (200 мкл Е+300 мкл Н2 О). Пробирки встряхивали и инкубировали 30 мин при 37°С. После инкубации в каждую пробу добавляли по 2,5 мл холодного раствора 0,15 М NaCl, центрифугировали и определяли степень гемолиза по величине A412 супернатанта.
Для учета степени лизиса (У) использовали формулу:
У(%)=[(X-R)/(H-R)×100],
где Н, R и Х - величины оптической плотности при A 412 гемолитичесхой системы при полном лизисе, в контроле спонтанного лизиса Е и в опытной пробе соответственно. Данные гемолиза эритроцитов барана с участием ГА и эндогенного комплемента приведены в табл.2.
Для определения величины (КЭФГА-СК ) использовали формулу:
КЭФГА-СК=У/Т ГА,
где У - степень лизиса, %, ТГА - обратный титр гетерофильных ангитет к эритроцитам барана.
Данные степени гемолиза эритроцитов барана, обусловленного гетерофильными антителами и эндогенным комплементом, титр гетерофильных антител и КЭФГА-СК приведены в табл.2.
Таблица 2
Определение КЭФГА-СК по данным степени лизиса и титра ГА
№ сыв. Система Степень лизиса (У, %) Титр ГА (1:..) КЭФГА-СК
1 Е+сыворотка 25 2 12,5
2 Е+сыворотка 90 16 5,63
3 Е+сыворотка 82 2 41
4 Е+сыворотка 54 2 27
5 Е+сыворотка 35 64 0,55
6 Е+сыворотка 83 16 5,19
7 Е+сыворотка 81 8 10,13
8 Е+сыворотка 87 16 5,44
9 Е+сыворотка 81 32 2,53
10 Е+сыворотка 84 8 10,50
11 Е+сыворотка 80 16 5,00
12 Е+сыворотка 89 64 1,39
13 Е+сыворотка 83 16 5,19
14 Е+сыворотка 95 32 2,97
15 Е+сыворотка 75 8 9,38
16 Е+сыворотка 99 32 3,09
17 Е+сыворотка 63 32 1,97
18 Е+сыворотка 53 16 3,31
19 Е+сыворотка 83 16 5,19
20 Е+сыворотка 75 32 2,34
Исследованные сыворотки по КЭФГА-СК распределились на 5 групп. Распределение по группам показано в табл.3.
Таблица 3
Распределение образцов сывороток по группам в зависимости от КЭФГА-СК
Группа 1 (высокий) Группа 2 (повышенный) Группа 3 (средний) Группа 4 (пониженный) Группа 5 (низкий)
№ сыв. КЭФГА-СК № сыв. КЭФГА-СК № сыв. КЭФГА-СК № сыв. КЭФГА-СК № сыв. КЭФГА-СК
3 41 1 12,50 2 5,63 9 2,53 5 0,55
4 27 7 10,13 6 5,19 12 1,39
10 10,50 8 5,44 14 2,97
15 9,38 11 5,00 16 3,09
13 5,19 17 1,97
19 5,19 18 3,31
20 2,34
34,0±9,9 10,63±1,33 5,27±0,22 2,51±0,68 0,55
Из данных табл.2 (степень лизиса, %) видно, что использование гетерофильных антител к эритроцитам барана в гемолитическом тесте, когда формируется иммунный комплекс (EA4) и активируется собственная система комплемента по классическому пути, позволяет сформировать иммунный комплекс приближенно к физиологическим условиям. Из табл.2 видно, что концентрация сыворотки 0,8% является оптимальной для анализа, так как уровень лизиса колеблется в пределах 75-95% от полного лизиса. В сыворотках 1, 4, 5 и 17 уровень лизиса составляет 25, 54, 35 и 63% соответственно. Такие результаты могли быть обусловлены либо низким содержанием ГА, либо низкой эффекторной функцией этих антител по способности активировать классический путь эндогенного комплемента. Действительно, в сыворотках №1 и 4 титр ГА был самым низким (1:2), а в сыворотке №5 самым высоким (1:64).
Таким образом, отношение степени лизиса (У,%) эритроцитов барана в 0,8% сыворотке крови человека к обратному титру гетерофильных антител в этой же сыворотке (ТГА) позволило авторам получить коэффициент (КЭФГА-СК) и по величине этого показателя исследованные сыворотки разделить на пять групп: высокий (более 13), повышенный (от 6 до 13), средний (от 5 до 6), пониженный (от 1,8 до 4,5) и низкий (ниже 1,8).
Учитывая то, что эффекторная функция антител, комплемент-активирующая активность, тесно связана с процессом солюбилизации и элиминации циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), в крови необходимо было сравнить эти показатели.
Этап 3. Сопоставление КЭФГА-СК в группах с относительным уровнем содержания циркулирующих иммунных комплексов.
Определение циркулирующих иммунных комплексов проводили с использованием набора реагентов “Микроанализ ЦИК” производства А/О “НПО СИНТЕКО” г. Москва. Принцип метода: находящиеся в сыворотке иммунные комплексы определяются при помощи преципитации полиэтиленгликолем 6000 (ПЭГ 6000) определенной концентрации путем сравнения величины светопропускания опытного (сыворотка в среде с ПЭГ) и контрольного (сыворотка в среде без ПЭГ). Нормальное содержание ЦИК в сыворотке крови человека этим методом составляет до 55 у.е.
Данные показателей КЭФГА-СК и ЦИК представлены на табл.4.
Таблица 4
Показатели КЭФГА-СКи ЦИК сыворотки крови
Группа 1 (высокий уровень КЭФГА-СК)
№ сыворотки 3 4 M±m
КЭФГА-СК 41 27 34,0±9,9
ЦИК, у.е. 65 70 67,50±3,54
Группа 2 (повышенный уровень КЭФГА-СК)
№ сыворотки 1 7 10 15 M±m
КЭФГА-СК 12,50 10,13 10,50 9,38 10,63±1,33
ЦИК, у.е. 82 55 110 87 83,50±22,58
Группа 3 (средний уровень КЭФГА-СК)
№ сыворотки 2 6 8 11 13 19 M±m
КЭФГА-СК 5.63 5.19 5.44 5.00 5.19 5.19 5,27±0,22
ЦИК. у.е. 52 40 32 74 57 115 61,67±29,87
Группа 4 (пониженный уровень КЭФГА-СК )
№ сыворотки 9 12 14 16 17 18 20 М±m
КЭФГА-СК 2,53 1,39 2,97 3,09 1,97 3,31 2,34 2,51±0,68
ЦИК. у.е. 75 160 87 120 80 112 40 96,29±38,39
Группа 5 (низкий уровень К ЭФГА-СК)
№ сыворотки 5
КЭФГА-СК 0.55
ЦИК. у.е. 21
Из представленных в табл. 4 данных видно, что наиболее предпочтительным показателем КЭФГА-СК является 5,27±0,22, так как в этой группе относительный уровень содержания ЦИК составляет 61,67-29,87 у.е. И если исключить сыворотку №19, то среднее содержание ЦИК составит 51,00±16,18 у.е. Такие показатели, как имеющиеся в сыворотке №9, могут предполагать состояние, когда при нормальной активации комплемента иммунными комплексами страдает элиминирование ИК с участием рецептора к С3b-CR1 рецептора эритроцитов человека.
Следовательно, КЭФГА-СК, рассчитанный по группе №3, можно принять за коэффициент в норме. Увеличение или уменьшение этого коэффициента сопровождается существенными сдвигами в относительном уровне содержания ЦИК. Эти сдвиги имеют определенную динамику, то есть при повышенных значениях этого коэффициента (10,63±1,33) наблюдается также увеличение относительного уровня содержания ЦИК (83,50±22,58 у.е.), а при более высоких значениях коэффициента (34,0±9,9) уровень ЦИК заметно снижается (67,50±3,54 у.е.).
Аналогичные эффекты наблюдаются при пониженных величинах КЭФГА-СК (2,51±0,68). Уровень содержания ЦИК составляет в этой группе 96,29±38,39 у.е., а при более низких значениях КЭФГА-СК (0,55) относительный уровень содержания ЦИК составляет всего 21 у.е.
Определение концентрации IgG, IgA и IgM в этих сыворотках проводили методом радиальной иммунодиффузии в геле (РИД). Данные содержания иммуноглобулинов представлены в табл.5.
Из представленных в табл.5 данных видно, что только в сыворотке №16 содержание IgM незначительно превышает нормальный показатель (на 0,02 мг/мл). Следовательно, определение содержания иммуноглобулинов методом РИД не выявило существенных отклонений от показателей в норме.
Таким образом, разработанный способ позволяет вести углубленное исследование не только клинически выраженных форм иммунологической недостаточности, но и доклинических форм иммунодефицита, аутоиммунных заболеваний, что открывает возможность для профилактики на самых ранних стадиях развития заболеваний, обусловленных нарушением иммунного статуса человека, обусловленных сдвигами в эффекторной функции гетерофильных антител (комплемент-активирующей способности иммуноглобулинов), которые приводят к нарушению утилизации иммунных комплексов.
Таблица 5
Содержание иммуноглобулинов (IgG, IgA, IgM) в сыворотке крови
№ сыворотки IgG, мг/мл (N=7,6-18,8) IgA, мг/мл (N=0,85-5,7) IgM, мг/мл (N=0,46-2,2)
1 9,2 2,42 0,89
2 11,96 4,6 1,32
3 9,34 2,6 1,55
4 11,96 3,58 1,17
5 11,96 2,61 0,74
6 8,80 1,27 1,22
7 11,60 4,79 0,81
8 13,45 4,79 0,85
9 10,59 3,14 0,60
16 8,3 1,43 2,22
17 9,4 2,13 0,67
18 9,7 2,85 1,07
19 10,3 1,43 1,21
M±m 10,50±1,55 2,90±1,24 1,10±0,44
ЛИТЕРАТУРА
1. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология: Пер. с англ. М.: Мир, 2000. - 592 с.
2. Bogers W.M.J.M., Stad R-K., van Es L., Daha M.R. Immunoglobulin A: Interaction with Complement, Phagocytic Cells and Endothelial Cells // Complement Inflamm. 1991. V.8. P.347-358.
3. Roos A., Bouwman L.H., van GijIswijk-Janssen D.J., et al. Human IgA Activates the Complement System Via the Mannan-Binding Lectin Pathway // J.Immunol. 2001. V.167. P.2861-2868.
4. Sahu A., Lambris J.D. Complement inhibitors: a resurgent concept in anti-inflammatory therapeutics // Immunopharmacology. 2000. V.49. P.133-148.
5. Клиническая иммунология и аллергология. Под ред. Г.Лолора-младшего, Т.Фишера и Д.Адельмана. Пер. с англ. М.: Практика, 2000. - 806 с.
6. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник /Меньшиков В.В., Делеторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др.: Под ред. В.В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987. - 368 с.
7. Muller-Eberhard H.J., Hoffmann L.G., Mayer M.M. Complement. In: Methods in Immunology and Immunochemistry / Eds. Williams C., Chase M.W. New York: Acad. Press. 1974. V.4. P.127-274.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ определения нарушения иммунного статуса человека, включающий исследование в сыворотке крови антител и циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), отличающийся тем, что определяют титр гетерофильных антител по методу Пауля-Буннелля, затем относительный уровень ЦИК методом преципитации ПЭГ 6000 и комплементактивирующие свойства гетерофильных антител, путем инкубации стандартизированных эритроцитов барана (1,5·108 кл/мл) при температуре 37±0,5°С в течение 30±5 мин с 0,8% сывороткой и с последующим измерением степени лизиса эритроцитов, после чего проводят расчет коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител по системе комплемента (КЭФГА-СК) по формуле:
КЭФГА-СК=У/Т ГА,
где У - степень лизиса, %, ТГА - обратный титр гетерофильных антител к эритроцитам барана, а определение нарушений иммунного статуса проводят путем сопоставления коэффициента эффекторной функции гетерофильных антител с относительным уровнем содержания (ЦИК) в сыворотке.
Независимый научно технический портал
На главную страницу раздела
