СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА
(51) МПК
G01N 33/571 (2006.01)
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Статус: по данным на 10.08.2007 - может прекратить свое действие
--------------------------------------------------------------------------------
Документ: В формате PDF
(14) Дата публикации: 2006.02.20
(21) Регистрационный номер заявки: 2004125573/15
(22) Дата подачи заявки: 2004.08.20
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2004.08.20
(45) Опубликовано: 2006.02.20
(56) Аналоги изобретения: RU 2200327 С2, 10.03.2003. RU 2244933 С2, 20.01.2005. RU 2157539 С2, 10.10.2000. SU 577018 A, 25.10.1977.
(72) Имя изобретателя: Карпунина Тамара Исаковна (RU); Коломойцев Александр Владимирович (RU); Сперанская Вера Николаевна (RU)
(73) Имя патентообладателя: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации" (RU)
(98) Адрес для переписки: 614990, г.Пермь, ул. Куйбышева, 39, ГОУ ВПО "ПГМА МЗ РФ", патентный отдел
(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА
Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и касается способа диагностики сифилиса. Сущность изобретения: перед постановкой раздельного ИФА для определения антитрепонемных антител сыворотку крови больного дополнительно обрабатывают магнитным сорбентом с иммобилизированным белком А стафилококка, который сорбирует IgG1 и IgG4. Преимущество изобретения заключается в повышении специфичности и упрощении способа. 1 табл.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике инфекций, передающихся половым путем (ИППП).
Известен способ диагностики сифилиса методом иммуноферментного анализа на твердофазном носителе, в качестве которого используют модифицированный полиглюкином композиционный алюмосиликатный магноиммуносорбент (RU 2200327 С2, 10.03.2003)
Недостатки прототипа: сложный, трудоемкий, требует много времени, не высоко специфичный, не позволяет дифференцировать различные формы заболевания.
Изобретение направлено на решение задачи: упрощение при высокой точности, повышение специфичности.
Технический результат: повышение специфичности способа за счет оценки класс-принадлежности иммуноглобулинов (IgM и IgG) и подклассов IgG.
Указанные задачи достигаются путем определения в сыворотке крови методом ИФА антитрепонемных антител IgM, IgGs после обработки ее магнитным сорбентом на основе белка А золотистого стафилококка штамма Cowan I. Магнитный сорбент входит в комплект препарата «Сангвидет» - диагностикума иммуноглобулинового для определения скрытой крови в фекалиях человека в реакции коагглютинации (ФСП №42-0028338002). Магнитный сорбент на основе белка А позволяет проводить аффинное выделение иммуноглобулина G, преимущественно подклассов IgG 1, Ig G2 и Ig G4 за счет Fc-рецепторных свойств лиганда (Е.В.Григорьева, В.Н.Сперанская, Н.М.Болдачева. Изучение возможности определения скрытой крови серологическими экспресс-методами. Журн. микробиологии, 1988, №2, с.26-28, Патент на изобретение №2147130 «Способ определения кровопотери из желудочно-кишечного тракта», 27.03.2000. Бюл. №9).
Данный реагент для диагностики сифилиса ранее не использовался.
Способ осуществляется следующим образом. У больного определяют класс-принадлежность иммуноглобулинов в ИФА в нативной сыворотке и после ее обработки магнитным сорбентом. На первом этапе определяют класс-принадлежность иммуноглобулинов в ИФА с использованием стандартных тест-систем (предварительный диагноз). Далее "истощают" нативную сыворотку с помощью магнитного сорбента. Для этого к небольшому количеству магнитного сорбента добавляют сыворотку, тщательно перемешивают осторожным встряхиванием при комнатной температуре в течение 30-40 мин и затем с помощью магнита проводят разделение суспензии на жидкую и твердую фазы. На втором этапе исследуют жидкую фазу для определения класс-принадлежности оставшихся в ней иммуноглобулинов в ИФА. При этом количество IgM остается неизменным, но может существенно снижаться содержание IgG за счет удаления подклассов IgG1, IgG2 и IgG 4. Возможные пять вариантов интерпретации получаемых результатов приведены в таблице.
Таблица
Варианты I этап (ИФА нативной сыворотки) II этап (ИФА сыворотки, обработанной магнитным сорбентом) Определение формы сифилиса
IgM IgG IgM IgG
1. положительно сомнительно (±) положительно отрицательно Первичный серонегативный
2. сомнительно (±) положительно положительно отрицательно Первичный серопозитивный
3. сомнительно (±) положительно положительно положительно (IgG3) Вторичный свежий
4. отрицательно положительно отрицательно положительно (IgG 3) Вторичный рецидивный
5. отрицательно положительно отрицательно отрицательно Поздние
Если на I и II этапах исследования получают результаты, соответствующие 1 варианту, то диагностируют первичный серонегативный сифилис; если 2 варианту - то диагностируют первичный серопозитивный сифилис; если 3 варианту - вторичный свежий сифилис; если 4 варианту - вторичный рецидивный сифилис; если 5 варианту - поздний сифилис.
Примеры конкретного выполнения
Пример 1
Больной К., 35 лет. Диагноз: Вторичный рецидивный сифилис.
Эпидемиологический анамнез: заболевание выявлено случайно при прохождении профилактического осмотра.
При осмотре выявлена мелкая диффузная розеолезная сыпь на коже туловища, папулезный сифилис, полисклераденит.
Обследование: RW с кардиолипиновым антигеном 3+ в титре 1:10, RW со спирохетным антигеном 4+ в титре 1:20, РИФ 4+, ИФА без сорбции выявил IgG (+), IgM не определялись (-). После обработки сыворотки реагентом в ИФА обнаружены IgM - (+) и IgG - (+). На этом основании поставлен диагноз: Сифилис вторичный свежий. Назначена специфическая антибактериальная терапия.
Пример 2
Больная А., 27 лет. Диагноз: Вторичный рецидивный сифилис. Беременность 10 недель.
Эпидемиологический анамнез: при постановке на учет по беременности проведено комплексное обследование, в том числе RW с кардиолипиновым антигеном - 4+ в титре 1:10. Больная направлена на консультацию к венерологу с диагнозом: Сифилис?
При осмотре обнаружены: диффузное поредение волос, незначительные проявления розеолезной сыпи, широкие кондиломы, полисклераденит. Проведено обследование: ИФА - IgM не обнаружены (-), IgG - определяются (+). После обработки реагентом: IgM - не обнаружены (-), IgG 3 - определяются (+). На основании комплексного обследования подтвержден диагноз: Вторичный рецидивный сифилис. Рекомендовано специфическое антибактериальное лечение, во второй половине беременности - профилактическая антибактериальная терапия с целью предупреждения врожденного сифилиса.
Пример 3
Больной М., 45 лет. Предварительный диагноз: Вторичный сифилис.
Анамнез: Обратился к дерматовенерологу в связи с появлением высыпаний на половых органах.
При осмотре в области половых органов обнаружено единичное плотное по виду папулезное образование с эрозией на поверхности, полисклераденит с преобладанием регионарного, диффузное поредение волос.
Обследование: RW с кардиолипиновым антигеном 4+ в титре 1:160, в отделяемом эрозии обнаружена Treponema pallidum, в ИФА до сорбции определяются IgM (+) и IgG (+), после обработки сорбентом: IgM определяются (+), IgG - не обнаружены (-). Проведенное комплексное обследование позволило провести дифференциальный диагноз между вторичным свежим и первичным серопозитивным сифилисом. Окончательный диагноз: Первичный серопозитивный сифилис. Назначена специфическая антибактериальная терапия.
Положительный эффект от использования предлагаемого способа состоит в следующем: способ высоко специфичен и информативен, экономически целесообразен, позволяет дифференцировать различные формы сифилиса за счет выявления минимальных количеств IgM, которые маскируются (не определяются) при избытке IgG, и обнаружения IgG3 - маркеров вторичного рецидивного сифилиса.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ диагностики сифилиса с помощью иммуноферментного метода (ИФА), включающий истощение сывороток с помощью магнитного сорбента и определение оставшихся в ней иммуноглобулинов, отличающийся тем, что перед обработкой сыворотки магнитным сорбентом в ней определяют класс-принадлежность иммуноглобулинов в ИФА с помощью стандартных тест-систем, а затем истощение сыворотки осуществляют магнитным сорбентом на основе белка А золотистого стафилококка штамма Cowan I, с помощью магнита проводят разделение суспензии на жидкую и твердую фазы и в жидкой фазе проводят повторное определение класс-принадлежности оставшихся иммуноглобулинов.
Независимый научно технический портал
На главную страницу раздела
