СПОСОБ ОСЛАБЛЕНИЯ ЭРОЗИВНО-ЯЗВЕННОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ (АСК) С ПОМОЩЬЮ ПЕПТИДА ФОРМУЛЫ Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly
(51) МПК
A61K 31/616 (2006.01)
A61K 38/08 (2006.01)
A61P 1/04 (2006.01)
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Статус: по данным на 29.08.2007 - действует
--------------------------------------------------------------------------------
Документ: В формате PDF
(14) Дата публикации: 2007.08.10
(21) Регистрационный номер заявки: 2005141112/14
(22) Дата подачи заявки: 2005.12.27
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2005.12.27
(45) Опубликовано: 2007.08.10
(56) Аналоги изобретения: RU 2155064 C1, 27.08.2000. Григорьева И.Н. Интрадуоденальная активность протеолитических ферментов при язвенной болезни, 1989, с.2-7. NZ 518186, 31.10.2003. Debeir T. et al. Pharmacological characterization of protease-activated receptor (RAP-1) in rat astrocytes.// Eur J Pharmacol. 1997. Mar 26; 323(1): p.111-117.
(72) Имя изобретателя: Флейшман Марина Юрьевна (RU); Тимошин Сергей Серафимович (RU); Дейгин Владислав Исакович (RU); Ярова Елена Петровна (RU)
(73) Имя патентообладателя: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Дальневосточный государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (RU)
(98) Адрес для переписки: 680000, г.Хабаровск, ул. Муравьева-Амурского, 35, Дальневосточный государственный медицинский университет, ОИС
(54) СПОСОБ ОСЛАБЛЕНИЯ ЭРОЗИВНО-ЯЗВЕННОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ (АСК) С ПОМОЩЬЮ ПЕПТИДА ФОРМУЛЫ Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly
Изобретение относится к медицине, в частности гастроэнтерологии, и может быть использовано для ослабления эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка при воздействии ацетилсалициловой кислоты (АСК). Для этого перед введением белым мышам через зонд АСК в дозе 200 мг/кг вводят внутрибрюшинно пептид формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly в течение 5 дней в дозе 100 мкг/кг. Способ позволяет создать эффективную защиту слизистой оболочки желудка от повреждающего действия АСК, снизить количество, размеры и суммарную площадь язв. 2 табл.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к медицине, в частности, к патологической анатомии и гастроэнтерологии.
Известно, что в ревматологии на фоне применения ацетилсалициловой кислоты (АСК) - нестероидного противовоспалительного препарата (НПВП) развивается эрозивно-язвенное поражение желудка и двенадцатиперстной кишки (НПВП-гастропатия), которое ассоциируется с высоким риском желудочно-кишечных кровотечений (Lichtenstein D.R., Syngal S., Wolfe M.M. Non-steroidal anti-inflammatory drugs and gastrointestinal hetract: the double-edged sword // Arthr. And Reum. - 1995. - Vol.38. - P.5-18). Современная стратегия предупреждения и лечения НПВП-гастропатий предполагает три основных направления:
1. Использование Н2-гистаминоблокаторов (циметидина, фамотидина и других), которые, являясь антисекреторными препаратами, снижают секрецию соляной кислоты и пепсина, однако НПВП-гастропатий могут развиваться на фоне гипоацидных состояний, и даже ахилии;
2. Применение ингибиторов протонного насоса (H +, K+ - АТФазы), эффективно снижающих желудочную секрецию независимо от природы раздражителя (омепразол), которые, однако, обладают многими побочными эффектами, повышают риск инфекций, маскируют клинику рака желудка;
3. Лечение синтетическими аналогами простгландина Е1 (мизопростол), обладающего цитопротекторным эффектом на слизистую оболочку желудка, но имеющих много побочных эффектов, как-то: боли в животе, диарея, воздействие на сосудистый тонус, и другие.
Следовательно, предложенный арсенал лекарственных препаратов не решает проблемы лечения НПВП-гастропатий, особенно верхних отделов ЖКТ (Насонов Е.Л., Каратеев А.Е. Гастропатия, связанная с приемом нестероидных противовоспалительных препаратов (часть II). Клиническая медицина, № 4, 2000, с.4-9).
В последние годы в качестве ростостимулирующего средства, увеличивающего массу тела и обладающего адаптогенными свойствами, используется олигопептид формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly (Патент RU № 2155064, С1 7 А61K 38/08, 27.08.2000), запатентованный как «седатин». Его применение и послужило наиболее близким аналогом, то есть прототипом в лечении гастропатий, вызванных АСК.
Задачей изобретения является создание эффективной защиты слизистой оболочки желудка (СОЖ) от повреждающего воздействия ацетилсалициловой кислоты (АСК).
Указанная задача достигается тем, что предварительно в эксперименте мышам вводили раствор пептида пятикратно внутрибрюшинно в дозе 100 мкг/кг с последующим введением через зонд ацетилсалициловой кислоты (АСК) в дозе 200 мг/кг, способствующей эрозивно-язвенному повреждению СОЖ. Растворителем АСК служил 30% водный раствор диметилсульфоксида. Эвтаназию осуществляли путем декапитации через 48 часа после зонда с АСК (через 24 часа после последней инъекции пептида), когда отмечались максимальные деструктивные изменения. За 1 час до эвтаназии животным внутрибрюшинно вводили 3H-тимидин из расчета 1,0 мкКюри на 1 г массы (удельная активность 84 Кюри/моль). После декапитации желудок извлекали и вскрывали его по большой кривизне. Поверхность слизистой оболочки изучали с помощью лупы. Площадь язв в слизистой оболочке желудка измеряли с помощью морфометрического анализатора компьютерного изображения «МЕКОС». Кусочки фундального отдела желудка фиксировали в смеси 96% этанол-уксусная кислота (3:1). Изготовление радиоавтографов, определение индекса меченых ядер (ИМЯ, %), интенсивности метки (ИМ, среднее число треков над ядрами) осуществляли по принятой в лаборатории методике. Индекс меченых ядер ИМЯ определяли в генеративной зоне после просмотра 1700-2100 клеток и выражали в процентах. Статистическую обработку материала проводили с помощью программы «Statistika 5.0». Различия между группами считали достоверными при p<0,05. В эксперименте использовано 103 белых лабораторных мыши.
Преимущество предлагаемого способа:
- возможность оценки состояния СОЖ в разных отделах под воздействием АСК, олигопептида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly в испытуемых группах и в контроле;
- объективность количественных критериев, имеющих прямую корреляционную связь с воздействием олигопептидла формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly;
- исследование эффекта олигопептида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly как препарата нового поколения, не применявшегося раннее в стратегии лечения НПВП-гастропатий;
- возможность в дальнейшем интраназального применения препарата;
Полученные результаты приведены в таблицах 1 и 2.
Таблица 1
Влияние пятидневного внутрибрюшинного введения седатина в дозе 100 мкг/кг на репаративные процессы в эпителии слизистой оболочки желудка белых мышей.
Группы Интактный контроль (1) АСК зонд (2) Седатин и АСК зонд (3) Изотонический NaCl и АСК зонд (4) Седатин (5)
Площадь язв (мкм2)×10 3 0 74,31±10,01 32,43±8,23* 95,13±12,21*, ** 0
Различия достоверны при p<0,05; * - Различия между (2) и (3); (2) и (4)
** - Различия между (3) и (4)
Как видно из таблицы 1, препарат достоверно уменьшает площадь язв СОЖ в группе (3) по сравнению с контрольными (1, 4) группами, что говорит о его протективном действии на фоне повреждающего влияния ацетилсалициловой кислоты.
Таблица 2
Влияние пятидневного внутрибрюшинного введения седатина в дозе 100 мкг/кг на процессы синтеза ДНК (ИМЯ, %) в эпителии фундального отдела желудка белых мышей.
группы Интактный контроль (1) АСК зонд (2) Седатин и АСК зонд (3) Изотонический NaCl и АСК зонд (4) Седатин (5)
ИМЯ (%) 7,09±0,51 4,72±0,49* 8,74±0,79** 5,79±0,51*** 12,56±1,42 *, **
ИМ 34,33±1,89 26,82±2,27* 36,08±4,54 36,33±1,95** 38,50±3,35
Различия достоверны при p<0,05; * - Различия между (1) и (2); (1) и (5);
** - Различия между (2) и (3); (2) и (4); (2) и (5);
*** - Различия между (3) и (4)
Как видно из таблицы 2, у животных, получавших посредством желудочного зонда ацетилсалициловую кислоту, имело место уменьшение количества ДНК-синтезирующих ядер в 1,5 раза. Другим важным показателем расстройства синтеза ДНК в этих условия было почти 1,3 кратное уменьшение ИМ, которое свидетельствует об уменьшении скорости синтеза ДНК под влиянием салицилатов. Предварительное (перед внутрижелудочным зондом АСК) введение пептида животным привело к полной нормализации процессов синтеза ДНК в эпителиоцитах. ИМЯ и ИМ достоверно не отличались от показателей интактного контроля.
Пример 1. Рассмотрим в качестве иллюстрации протективного эффекта олигопетида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly количественные показатели язв СОЖ у мышей из трех подопытных групп (2, 3, 4)
Интактный контроль, группа (1) и седатин, группа (5) - язв нет
АСК зонд, группа (2) - количество язв - 5
Суммарная площадь всех язв - 127821.46 (мкм2)
Длина наибольшей язвы - 262.77 (мкм)
Длина наименьшей язвы - 157.82 (мкм)
Седатин и АСК зонд, группа (3) - количество язв - 1
Суммарная площадь всех язв - 13801.27 (мкм 2)
Длина наибольшей язвы - 78.08 (мкм)
Длина наименьшей язвы - 56.69 (мкм)
Изотонический NaCl и АСК зонд, группа (4) - количество язв - 4
Суммарная площадь всех язв - 123394.04 (мкм)
Длина наибольшей язвы - 234.19 (мкм)
Длина наименьшей язвы - 159.73 (мкм)
Пример 2. Оценка влияния пептида на процессы регенерации эпителиоцитов в фундальном отделе желудка белых мышей.
Для демонстрации влияния пептида на процессы регенерации эпителиоцитов фундального отдела желудка приводим величины ИМЯ и ИМ мышей из различных экспериментальных групп
Интактный контроль, группа (1) - ИМЯ - 7,75; ИМ - 40,60
АСК зонд, группа (2) - ИМЯ - 3,95; ИМ - 24,3
Седатин и АСК зонд, группа (3) - ИМЯ - 8,17; ИМ - 37,2
Изотонический NaCl и АСК зонд, группа (4) - ИМЯ - 4,17; ИМ - 29,3
Седатин, группа (5) - ИМЯ - 10,03; ИМ - 36,5
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ ослабления эрозивно-язвенного повреждения слизистой оболочки желудка при воздействии ацетилсалициловой кислоты (АСК) в эксперименте, включающий введение пептида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly, отличающийся тем, что пептид вводят белым мышам внутрибрюшинно в течение 5 дней в дозе 100 мкг/кг с последующим введением через зонд АСК в дозе 200 мг/кг.
Независимый научно технический портал
На главную страницу раздела
