ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2286790
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ СТРЕССОВОГО НЕДЕРЖАНИЯ МОЧИ
Имя изобретателя: Кулаков Владимир Иванович (RU); Сухих Геннадий Тихонович (RU); Балан Вера Ефимовна (RU); Сметник Вера Петровна (RU)
Имя патентообладателя: Государственное учреждение Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии Российской академии медицинских наук
Адрес для переписки: 117997, Москва, ул. Акад. Опарина, 4, ГУ НЦ акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН, Директору
Дата начала действия патента: 2005.03.16
Изобретение относится к области медицины и касается лечения стрессового
недержания мочи у женщин путем введения фетальных стволовых клеток. В рабдосфинктер
парауретрально вводят 40 млн. стволовых миобластов и фибробластов, полученных от плодов
8-12 недель гестации, при соотношении клеток 5-4:3-2. Способ расширяет арсенал средств
лечения стрессового недержания мочи у женщин, позволяет исключить хирургическое
вмешательство.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к терапии, в частности к способам лечения
стрессового недержания мочи.
Урогенитальные расстройства в климактерии - комплекс вагинальных и мочевых
симптомов, развитие которых является осложнением атрофических и дистрофических
процессов в эстрогензависимых тканях и структурах нижней трети мочеполового тракта:
мочевом пузыре, уретре, влагалище, связочном аппарате и мышцах тазового дна.
В настоящее время единственным способом лечения стрессового недержания мочи
является хирургический, который насчитывает более 200 модификаций (Х.Хирш, О.Кезер, Ф.Икле
"Оперативная гинекология" Изд-во ГЭОТАР Медицина, М., 1999, стр.407).
Недостатком способа являются высокая частота рецидивов и осложнения, обусловленные
хирургическим вмешательством.
Описана попытка лечения недержания мочи у 8 пациентов путем трансуретральной
инъекции в рабдосфинктер и уретру комбинации аутологичных стволовых клеток,
производных мышечной ткани и клеток соединительной ткани (Shiomo Pas MD "Stem cell offer exciting
approach to urinary incontinence treatment" Urology Times 1 July, 2004).
Хотя популяция плюрипотентных клеток была получена из скелетных мышц, однако авторы
публикации не приводят данных, подтверждающих, что используемые клетки на самом деле
были стволовыми, равно как и об успехе лечения во временном интервале.
Недостатком способа является его длительность, связанная с необходимостью забора
клеточного материала и выращиванием стволовых клеток на его основе.
Задача изобретения - упрощение способа лечения стрессового недержания мочи у женщин
за счет использования более доступного аллогенного клеточного материала.
Поставленная задача решается способом лечения недержания мочи, заключающимся в том,
что вводят аллогенные эмбриональные или фетальные соматические стволовые клетки
человека - миобласты и фибробласты при их соотношении 5-4:3-2 парауретрально в
рабдосфинктер.
Получение культуры клеток, обогащенной миобластами человека для последующей
трансплантации.
Трупный абортивный материал доставляли в аутопсийный блок в термоконтейнере (+4°С) не
позднее, чем через 4 часа после искусственного прерывания беременности. Плоды отмывали
стерильным физиологическим раствором с антибиотиками. Поперечно-полосатые мышцы
выделяли из плодов человека 8-12 недель гестации, отмывали забуференным физиологическим
раствором (PBS) рН 7,3 с добавлением антибиотиков. Фрагменты мышечной ткани подвергали
механической диссекции в стерильных чашках Петри (35 мм) до размеров не более 1,0 мм × 1,0
мм. Дважды отмывали PBS, центрифугируя при 800 g в течение 3-х минут. Кусочки мышечной ткани
диссициировали на отдельные клетки инкубацией при 37°С с 0,2% коллагеназой в течение 15
минут. Затем отмывали дважды PBS.
Популяцию клеток, обогащенную миобластами, помещали в культуральные флаконы в
концентрации 500000 кл/мл в среде для культуры клеток: F12 и DMEM в соотношении 1:1, с
добавлением фетальной эмбриональной сыворотки, L-глютамина, хепеса, бикарбоната натрия,
антибиотиков. Клетки культивировали при 37°С в атмосфере с 5% СО2 до получения
монослоя, фибробласты удаляли при пассировании. Смену среды проводили каждые 3 дня на
50-75%. Суспензию, обогащенную миобластами, культивировали по вышеописанной схеме до 3
пассажа, затем использовали для трансплантации или замораживали по стандартной
программе с переносом в жидкий азот.
Получение культуры клеток фибробластов человека для последующей трансплантации.
Трупный абортивный материал доставляли в аутопсийный блок в термоконтейнере (+4°С) не
позднее, чем через 4 часа после искусственного прерывания беременности. Плоды отмывали
стерильным физиологическим раствором с антибиотиками. Ткань кожи выделяли из плодов
человека 8-12 недель гестации, отмывали забуференным физиологическим раствором (PBS) рН=7,3
с добавлением антибиотиков. Фрагменты кожи подвергали механической диссекции в
стерильных чашках Петри (35 мм) до размеров не более 1,0 мм × 1,0 мм. Дважды отмывали PBS,
центрифугируя при 800 g в течение 3-х минут. Кусочки мышечной ткани диссициировали на
отдельные клетки инкубацией при 37°С с 0,2% коллагеназой в течение 25 минут. Затем отмывали
дважды PBS.
Популяцию клеток, обогащенную фибробластами, помещали в культуральные флаконы в
концентрации 500000 кл/мл в среде для культуры клеток: F12 и DMEM в соотношении 1:1, с
добавлением 10% фетальной сыворотки теленка, L-глютамина, хепеса, бикарбоната натрия,
антибиотиков. Клетки культивировали при 37°С в атмосфере с 5% СО2 до получения
монослоя. Смену среды проводили каждые 3 дня на 50-75%. Фибробласты культивировали по
вышеописанной схеме до 3 пассажа, затем использовали для трансплантации или
замораживали по стандартной программе с переносом в жидкий азот.
Нижеследующий пример иллюстрирует способ по изобретению.
Больная Л.К., 55 лет, страдает стрессовым недержанием мочи в течение 5 лет. Кашлевая
проба положительна, проба Вальсалвы положительна, комплексное уродинамическое
исследование - недостаточность замыкательного аппарата мочевого пузыря, снижение
максимального внутриуретрального давления на 50%, лечение заместительной гормональной
терапией без эффекта. Пациентке парауретрально в рабдосфинктер ввели 40 млн.
эмбриональных стволовых миобластов и фибробластов при соотношении клеток 4:2.
Наблюдение за больной уже через две недели показало клиническое улучшение:
1. Удерживает мочу при нагрузке (кашель, смех).
2. Проба Вальсалвы отрицательна.
Дальнейшее наблюдение за пациенткой (в течение 5 месяцев) показало сохранение
лечебного эффекта.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ лечения стрессового недержания мочи у женщин путем введения
клеточного материала в рабдосфинктер, отличающийся тем, что в рабдосфинктер
парауретрально вводят 40 млн. стволовых миобластов и фибробластов, полученных от
плодов 8-12 недель гестации, при соотношении клеток 5-4:3-2.
Версия для печати
Дата публикации 06.01.2007гг
вверх
|
