СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭНДОТОКСИНЕМИИ У ДЕТЕЙ С АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ
(51) 7 G01N33/53
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Статус: по данным на 09.07.2007 - прекратил действие
--------------------------------------------------------------------------------
(14) Дата публикации: 2001.12.27
(21) Регистрационный номер заявки: 2000126678/14
(22) Дата подачи заявки: 2000.10.23
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2000.10.23
(45) Опубликовано: 2001.12.27
(56) Аналоги изобретения: ХАБРИЕВ Р.У. и др. Успехи теоретической медицины. - М., 1995, с.10-14. RU 2088936 C1, 27.08.1997. RU 2098824 C1, 10.12.1997.
(71) Имя заявителя: Казанский государственный медицинский университет
(72) Имя изобретателя: Шамова А.Г.; Маланичева Т.Г.
(73) Имя патентообладателя: Казанский государственный медицинский университет
(98) Адрес для переписки: 420012, г.Казань, ул. Бутлерова, 49, Казанский государственный медицинский университет, патентный отдел, А.К.Сибгатуллиной
(54) СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭНДОТОКСИНЕМИИ У ДЕТЕЙ С АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ
Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии. Способ осуществляют путем иммуноферментного анализа крови, при этом определяют содержание антител к к гликолипиду (ГЛП) и кишечной (E.coIi) и при их соотношении, равном I, 00, 2, констатируют наличие синдрома эндотоксинемии в стадии ремисии, а при 2,50,4 - в стадии обострения. Способ позволяет установить патогенетическую значимость эндотоксинемии при бронхиальной астме.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии.
Целью изобретения является установление патогенетической значимости эндотоксина при бронхиальной астме у детей на основании маркеров эндотоксинемии определения титров антител к гликолипиду (ГЛП) и кишечной палочке (E.coli).
Непрерывный рост частоты бронхиальной астмы у детей, нарастание тяжелых форм, приводящих к инвалидизации, резистентность к терапии требуют поиска новых механизмов в формировании данной патологии. Общепатологическим фактором, индуцирующим развитие различной патологии, в том числе и неинфекционной, является системная эндотоксинемия [3]. Эндотоксин - компонент клеточной стенки большинства грамотрицательных бактерий. В физиологических условиях организма эндотоксин находится в кишечнике, а его незначительная часть попадает в кровоток. Эндотоксин в организме способен изменять регуляцию антителогенеза, активировать В-лимфоциты, приводить к освобождению биологически активных веществ клеточную гипоксию, угнетение окислительно-восстановительных процессов и глубокие метаболические нарушения. В настоящее время изучена роль эндотоксина в формировании ОРВИ, респираторного дистресс-синдрома, заболеваний печени, почек, инфаркте миокарда и др. состояниях [2,3]. В литературе отсутствуют данные об эндотоксинемии и степени ее специфической компенсации при бронхиальной астме у детей. Показано только участие эндотоксина, присутствующего в домашней пыли, в модулировании остроты симптомов и легочной функции при данной патологии [4,5]. При этом эндотоксин рассматривается как неспецифический и "повоспалительный" фактор. Но до сих пор не найдены критерии установления факта участия эндотоксина при бронхиальной астме [4].
Специфическими маркерами ответной реакции организма на системную эндотоксинемию являются антитела к ГЛП. Помимо этого для оценки состояния антиэндотоксинового иммунитета важным является определение уровня антител к E.coli, как основному представителю бактерий кишечника. В доступной нам литературе не было найдено материалов по использованию определения антител к ГЛП и E. coli как установления факта участия эндотоксина в формировании бронхиальной астмы у детей.
Концентрацию антител в сыворотке крови определяли твердо-фазным иммуноферментным методом [1]. Для этого плоскодонные планшеты сенсибилизировали антигенами в оптимальной дозировке (от 2,5 до 5 мкг/мл) в течение 24 ч при 4oС. Сенсибилизированные планшеты подвергали блокировке 0,5%-ным раствором альбумина в течение одного часа при температуре 37oC. После промывания забуферным физиологическим раствором (ЗФР) с 0,05%-ным раствором твин-80 в лунки вносили по 200 мкл исследуемой сыворотки в разведении 1:50 в том же ЗФР с твином. После инкубации при 37oC в течение часа и отмывки от несвязавшихся антител тем же растворителем связанные антитела выявляли коммерческим препаратом конъюгата белка А с пероксидазой хрена, используемого в тест-системах на ВИЧ-антитела. Хромогенную реакцию проводили с фенилендиамином с последующей остановкой 10%-ным раствором серной кислоты. Для определения концентрации выявляемых антител на том же планшете ставили реакции с разведениями аффинно-выделенных антител той же специфичности. Результаты выражали в микрограммах белка антител на миллилитр сыворотки крови.
Обследовано 82 ребенка с атонической бронхиальной астмой в возрасте от 10 мес до 15 лет. Мальчики составили 67,1%, девочки - 32,9%. В возрастной структуре детей до 3 лет - 11%, от 3 до 7 лет 20,7%, от 7 до 15 лет - 68,3%. Тяжелое течение заболевания отмечалось у 15,8% детей, среднетяжелое у - 63,2%, легкое - у 21,0%. Контрольную группу составили 34 практически здоровых ребенка без аллергически измененной реактивностью и очагов хронической инфекции. Различия по полу и возрасту между сравниваемыми группами статистически незначимы.
У детей с атопической бронхиальной астмой в периоде обострения отмечается достоверное повышение уровня антител к ГЛП до 23,3 1,6 мкг/мл, что в 2,5 раза превышает показатели контрольной группы - 9,1 1,7 мкг/мл (р<0,001), а также снижение количества антител к кишечной палочке до 9,5 0,5 мкг/мл, что в 1,6 раза ниже, чем у практически здоровых детей - 15,3 2,0 мкг/мл (р<0,001). Причем изучение индивидуальных значений показателей выявило, что повышение уровня антител к ГЛП отмечалось у 95,1% детей, а снижение антиэшерихиозных антител - у 87,8%.
В периоде ремиссии бронхиальной астмы выявлено снижение уровней антител к ГЛП (р<0,001) в 1,5 раза до 15,8 1,2 мкг/мл, а также повышение к кишечной палочке (р<0,001) в 1,6 раза до 15,1 1,2 мкг/мл.
Наряду с определением уровня антител к ГЛП и E.coli оценивали и их соотношение < Р. Так, у практически здоровых детей Р составляет 0,6. В периоде обострения атонической бронхиальной астмы происходит увеличение Р до 2,5, в периоде ремиссии - снижение до 1,0.
Таким образом, анализ маркеров эндотоксинемии у детей с атонической бронхиальной астмой выявил, с одной стороны, рост (р<0,001) в приступном периоде уровня антител к ГЛП, а с другой стороны, снижение (р<0,001) количества антител к кишечной палочке. В период ремиссии отмечается достоверное снижение уровня антител к ГЛП и повышение содержания антиэшерихиозных антител. Причем количество антител к кишечной палочке достигает значений контрольной группы, а уровень антител к ГЛП остается достоверно выше, чем у практически здоровых детей.
Полученные данные подтверждают патогенетическую значимость эндотоксина при атопической форме бронхиальной астмы у детей. Возможным источником эндотоксина является E.Coli, что подтверждается снижением уровня антител к кишечной палочке в периоде обострения, вероятно, в связи с истощением механизмов компенсации. Учитывая достоверный рост (р<0,001) в периоде ремиссии антиэшерихиозных антител и достижение уровня показателей контрольной группы, можно предположить компенсаторный характер изменений.
Преимуществом и новизной данного способа является то, что установлена патогенетическая значимость эндотоксинемии при бронхиальной астме у детей на основании динамического изменения содержания его специфических маркеров - повышения концентрации антител к ГЛП и снижения - к E.coli.
Пример.
Больная 11 лет, находилась на стационарном лечении во 2-й детской клинической больнице с 28.04 по 18.05.98 г. (история болезни N 1381) с диагнозом: Бронхиальная астма, атопическая форма, период обострения, средней тяжести, поливалентная аллергия. ДЖВП по гипотоническому типу. Реактивный панкреатит. Дисбактериоз кишечника.
Жалобы при поступлении на приступы удушья, свистящее дыхание, приступообразный кашель. Больна с 2-х летнего возраста. Первые приступы бронхообструкции отмечались на фоне ОРВИ, в дальнейшем стали рецидивировать с частотой 2-3 раза в месяц длительностью 2-3 часа, ухудшение преимущественно в ночные часы. Приступы начинаются внезапно, на фоне нормальной температуры и самочувствия. Больной в периоде ремиссии проведено кожное тестирование и выявлена этиологическая значимость домашней пыли, D. pteronissinum, шерсти кошки.
Анамнез жизни: от IV беременности, протекавшей с токсикозом 1 половины, нефропатией II степени, анемией, роды II срочные, родилась в асфиксии, вес при рождении 4200 г, на грудном вскармливании находилась до 2-х месяцев, затем на искусственном. Наследственность отягощена - у отца псориаз, у матери - ревматизм. Перенесенные заболевания: коклюш, ОРВИ, рецидивирующие обструктивные бронхиты.
При поступлении общее состояние средней тяжести за счет дыхательной недостаточности. Одышка экспираторного характера с участием вспомогательной мускулатуры в акте дыхания, положение вынужденное с фиксацией верхнего плечевого пояса. Ребенок возбужден. Кожные покровы бледные, отмечается периорбитальный и периоральный цианоз. В зеве гиперемии нет. Лимфатические узлы не увеличены. В легких по всем полям выслушиваются сухие свистящие и разнокалиберные влажные хрипы, перкуторно над легкими коробочный звук. Тоны сердца ясные, ритмичные. Пульс 92 удара в минуту, ритмичный, удовлетворительного наполнения и напряжения. Живот мягкий, болезненный в правом подреберье, печень у края реберной дуги, билиарные симптомы слабо положительные. Стул оформлен, диурез не нарушен.
Назначено лечение: гипоаллергенная диета, гипоаллергенное окружение, сальбутамол, эуфилин, бромгексин, рибоксин, интал.
Гемограмма: L - 5,8109/л, n - 4%, с - 62%, э - 5%, м - 5%, л - 26%.
Функция внешнего дыхания: PEF составил 280 л/мин (при норме - 371 л/мин), то есть составляет 75,4% от нормы.
Иммунограмма: CD3+ -60%, CD4+ -48%, CD8+ -17%, ИРИ - 2,8, CD19+ - 18,2%, CD56+ - 8,8%, IgA - 1,4 г/л, IgG - 8,4 г/л, IgM - 2,0 г/л, ЦИК - 0,058 ед, CH50 - 40,2%, НСТ сп - 17%, НСТ ст - 15, ФИ лат. - 48%, ФЧ лат. - 4, ФИ st - 35%, ФЧ st - 3,8, IgE - 480 ЕД.
Показатели антиэндотоксинового иммунитета:
антитела к ГЛП в периоде обострения 21,1 мкг/мл, в периоде ремиссии 12,2 мкг/мл; антитела к E.coli в периоде обострения - 10,0 мкг/мл, в период ремиссии - 14,8 мкг/мл. Показатель соотношения Р в обострении - 2,1, в ремиссиии - 0,8.
Таким образом, у ребенка отмечаются увеличение маркеров эндотоксинемии - количества антител к ГЛП со снижением в ремиссии в 1,7 раза и понижение содержания антител к E.coli с повышением в периоде ремиссии в 1,5 раз, что подтверждает участие эндотоксина в формировании бронхиальной астмы у детей.
Источники информации
1. Зинкевич О. Д. , Кравченко И.Э., Фазылов В.Х., Сафина Н.А. и соавт. Влияние ксимедона на состояние гуморального антибактериального иммунитета у больных ангиной // Каз.мед.журнал. 1998. - N 5. - С. 354 - 358.
2. Уразаев Р.А., Крупник А.Н., Яковлев М.Ю. Эндотоксинемия в раннем периоде адаптации новорожденных и их матерей // Каз. мед. журнал - 1992 - N 2. - C. 114-118.
3. Хабриев Р.У. и др. Оценка состояния здоровья человека диагностической тест-системой "СОПС-ИФА" успехи теоретической медицины, Москва, 1995., - С. 10 - 11.
4. Michel O. Indoor Endotoxin and Asthma //Allergy & clinical immunology International - 1999. - Vol. 11. N 4. - P. 109 - 111.
5. Nightingale J.A., Rogers D.F., Hart L.A., Kheritonov R. et al. Effect of inhaled endotoxin on induced sputum in normal, atopic and atopic asthmatic subjects // Thorax. - 1998. - N 53. - P.563 - 571.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ оценки эндотоксинемии у детей с атопической бронхиальной астмой путем иммуноферментного анализа крови больного, отличающийся тем, что определяют содержание антител к гликолипиду (ГЛП) и кишечной палочке (Е.coIi) и при их соотношении, равном 1,00,2, констатируют наличие синдрома эндотоксинемии в стадии ремиссии, а при 2,50,4 - в стадии обострения.
Независимый научно технический портал
На главную страницу раздела
