СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЯИЦ ТРЕМАТОД
(51) 7 A01K67/033
(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Статус: по данным на 10.08.2007 - прекратил действие
--------------------------------------------------------------------------------
(14) Дата публикации: 2002.11.27
(21) Регистрационный номер заявки: 2001108560/13
(22) Дата подачи заявки: 2001.03.30
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2001.03.30
(45) Опубликовано: 2002.11.27
(56) Аналоги изобретения: КОТЕЛЬНИКОВ Г.А. Гельминтологические исследования окружающей среды. - М.: Росагропромиздат, 1991, с.48-49. COLD D., GOLDBERG M. Ettect of light and temperature on hatching in F. Hepatica (Trematoda; Fasciola) J.ZOOL. 1976, v.25, № 4, p. 178-185.
(71) Имя заявителя: Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны Российской Федерации
(72) Имя изобретателя: Горчаков В.В.
(73) Имя патентообладателя: Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны Российской Федерации
(98) Адрес для переписки: 603600, г.Нижний Новгород, ГСП-847, ул. Ветеринарная, 3, НИВИ НЗ РФ
(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЯИЦ ТРЕМАТОД
Изобретение относится к экспериментальной паразитологии. Способ состоит в том, что яйца трематод получают непосредственно из половых органов половозрелых гельминтов, а культивирование осуществляют в 0,3-0,4%-ном растворе мочевины (рН 6,7-6,9) при температурном оптимуме. Способ позволяет повысить выход личинок, увеличить продолжительность их жизни (до 36 дней), поддерживать их инвазиоспособность в течение 4-6 дней. 1 табл.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к экспериментальной паразитологии, касается способа культивирования яиц трематод и может быть использовано для получения инвазионного материала в экспериментальных целях.
Известен способ культивирования яиц трематод, включающий получение яиц трематод из кала или желчи зараженных животных с последующим культивированием в периодически сменяемой дистиллированной воде при температурном оптимуме (1, 2). Недостатки способа - сложность осуществления и низкая эффективность из-за недостаточного количества и низкого качества инвазионного материала (выход личинок около 30%, продолжительность жизни личинок - 18 часов, инвазиоспособность сохраняется в течение 2,5-3 часов после вылупления).
Цель изобретения - повышение эффективности при упрощении способа.
Сущность изобретения заключается в том, что яйца трематод получают непосредственно из половых органов половозрелых гельминтов, а для культивирования используют 0,3-0,4%-ный раствор мочевины с содержанием азота 461%.
На основании проведенных исследований по источникам патентной и научно-технической литературы можно сделать вывод, что совокупность существенных признаков является новой и обеспечивает повышение эффективности вследствие увеличения количества и повышения качества инвазионного материала.
Технический результат выражается в том, что предлагаемый способ позволяет увеличить выход личинок (до 70%), продолжительность их жизни (до 36 часов) и поддерживать их инвазиоспособность в течение 6-8 часов после вылупления.
Способ культивирования яиц трематод осуществляется следующим образом. 0,3-0,4%-ный раствор мочевины со сроком хранения не более 12 месяцев готовят растворением расчетного количества мочевины в отстоенной не менее 6 дней дистиллированной воде с тщательным перемешиванием на магнитной мешалке или стеклянной палочкой в течение 30 минут. Яйца трематод получают непосредственно из половых органов половозрелых гельминтов и после промывки помещают в свежеприготовленный 0,3-0,4%-ный раствор мочевины с рН 6,7-6,9 из расчета 500-600 яиц на 50 мл раствора и культивируют при температурном оптимуме.
Сущность способа поясняется примерами.
Пример 1. Готовят 0,3%-ный раствор мочевины, доводят до рН 6,8, температуру раствора до 21oС. 50 мл раствора заливают в чашку Петри. На часовом стекле с небольшим количеством дистиллированной воды у половозрелых гельминтов Fasciola hepatica, собранных из желчных ходов печени крупного рогатого скота, с помощью препаровальных игл из половых органов в воду выделяют яйцо. Для получения чистой фракции осадок пропускают через сито с размером ячеек 0,6 мм с последующим трехкратным промыванием. С помощью пипетки 500-600 яиц помещают в чайку Петри с 50 мл раствора, закрывают крышкой. Закрытую чашку Петри помещают в термостат. Культивирование осуществляют при температуре 28oС в течение 14 дней без смены среды. Для получения личинок чашку Петри выставляют на свет (яркость светового потока 200 люкс) при температуре 21-24oС. Выход личинок составляет 46%, продолжительность жизни 23-25 час.
Пример 2. Проводят культивирование яиц трематоды Fasciola hepatica предлагаемым способом в 4 сериях опытов с использованием раствора мочевины концентрацией 0,3, 0,35, 0,4 и 0,45% в сравнении с известным. Приготовление растворов и подготовка яиц для культивирования, как в примере 1. Эффективность определяют по количеству (выход личинок) и качеству инвазионного материала. Результаты представлены в таблице.
Из таблицы видно, что предлагаемый способ при испытанных концентрациях раствора мочевины обеспечивает увеличение количества и повышение качества инвазионного материала. Наилучшие показатели получены при использовании 0,35%-ного раствора мочевины. При концентрации раствора мочевины 0,4% показатели эффективности снижаются до уровня, отмеченного при использовании 0,3%-ного раствора мочевины, что подтверждает нецелесообразность такого повышения и обоснованность параметров предлагаемого способа.
Из приведенных примеров видно, что предлагаемый способ отличает от прототипа простота осуществления и эффективность. Предлагаемый способ позволяет культивировать как сформированные (т.е. прошедшие весь цикл внутригельминтного формирования), так и неполностью сформированные яйца трематод, и получать инвазионный материал с характеристиками, оптимальными для экспериментальных исследований.
Источники информации
1. Г.А. Котельников Гельминтологические исследования окружающей среды. - М.: Росагропромиздат, 1991. - С.48-49.
2. Gold D., Goldberb M. Effect or light and temperature on hatching in F. Hepatica (Trematoda; Fasciola) //J.Zool. - 1976. - v.25 - 4. - P.178-185.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ культивирования яиц трематод, включающий получение яиц трематод и их культивирование в жидкой среде при температурном оптимуме, отличающийся тем, что яйца трематод получают из половых путей половозрелых гельминтов, а культивирование осуществляют в растворе мочевины концентрацией 0,3-0,4% и рН 6,7-6,9.
Независимый научно технический портал
На главную страницу раздела
