Имя изобретателя: Перевозчиков П.А. (RU); Малов В.М. (RU); Жаров В.В. (RU); Точилова Е.Р. (RU)
Имя патентообладателя: Республиканская офтальмологическая клиническая больница (RU); Перевозчиков Петр Арсентьевич (RU)
Адрес для переписки: 426076, Удм.республика, г.Ижевск, ул.Коммунаров, 204, кв.37, П.А.Перевозчикову
Дата начала действия патента: 2003.02.05

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии и может быть использовано при лечении дистрофических заболеваний роговицы, особенно при буллезной кератопатии. Осущесвтляют аллотрансплантацию пластом фетальных клеток эндотелия роговой оболочки человека с десцеметовой мембраной и частично стромой. Пласт клеток располагают под слизистой оболочкой глаза эндотелиальным слоем к эписклере так, что он принимает контур фиброзной оболочки, примыкая одним концом к лимбу глаза. Пласт стволовых фетальных клеток эндотелия располагают в направлении меридиана 12±30’ ч. После восстановления прозрачности роговой оболочки глаза пласт фетальных клеток удаляют по мере необходимости. Способ позволяет обеспечить контроль за процессом лечения, а после получения желаемого эффекта - восстановления прозрачности роговицы, аллотрансплантат может быть извлечен из под слизистой оболочки глаза.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии и может быть использовано при лечении дистрофических заболеваний роговицы, особенно при буллезной кератопатии.

Известен способ лечения заболевания роговицы [1, 2].

Способ заключается в том, что вводят суспензию культивированных in vitro фетальных клеток роговицы субъконъюнктивально и методом инстиляции в конъюнктивальный мешок, для чего используют суспензию эмбриональных клеток в концентрации 106 кл/мл и соотношении: 80% -эндотелиоциты и 20% - стромальные фиброциты. При этом источником культуры фетальных клеток служит ткань роговицы 14-22-недельных эмбрионов человека, полученных при искусственном прерывании беременности.

Учитывая то, что фетальные ткани обладают рядом доказанных уникальных и незаменимых свойств, а именно: повышенный пролиферативный потенциал, сниженная антигенная ативность, содержание ряда ростовых, антибактериальных и анальгезирующих факторов [3], применение их в лечении заболевания глаз представляется перспективным.

Однако, несмотря на простоту методики трансплантации, в данном способе существует ряд недостатков.

Суспензия клеток, вводимая в конъюнктивальный мешок по прототипу, получена в результате воздействия фермента на клеточную культуру, который обладает свойствами не только разрушать межклеточные взаимоотношения и связи, но и повреждать саму мембрану клетки, что значительно снижает ее жизнеспособность, приводит к гибели и в конечном итоге уменьшает биологический эффект трансплантации. Кроме того, в суспензии отсутствуют элементы десцеметовой оболочки, которая, как известно, содержит факторы, регулирующие и стимулирующие репаративную способность эндотелия роговицы, что также снижает эффективность трансплантации. В данном способе отсутствует метод контроля за вводимыми при инстиляции в глаз реципиента фетальными клетками, содержащимися в каплях жидкости. Способ недоступен для широкого применения в офтальмологических клиниках без специально созданных условий для культивирования клеток (наличия необходимого дорогостоящего оборудования и инструментария, питательных сред и т. д.), что требует больших материальных затрат. В связи с этим задачей предлагаемого способа является ускорение репаративной регенерации эндотелиального слоя роговицы пациента путем трансплантации фетальных клеток под слизистую глаза.

Указанная цель достигается тем, что в способе лечения заболеваний роговицы аллотрансплантацию осуществляют пластом фетальных клеток эндотелия роговой оболочки человека с десцеметовой мембраной и частично стромой, который располагают под слизистой оболочкой глаза эндотелиальным слоем к эписклере так, что он принимает контур фиброзной оболочки глаза пациента, примыкая одним концом к лимбу глаза.

Кроме того, пласт стволовых фетальных клеток эндотелия располагают в направлении меридиана 12±30’ ч, а затем после восстановления прозрачности роговой оболочки глаза пациента пласт фетальных клеток удаляют по мере необходимости.

Способ осуществляется следующим образом

Проводят забор пласта фетальных клеток эндотелия роговой оболочки человека с десцеметовой оболочкой и частично стромой из фетальной роговицы, полученной в случае искусственного прерывания беременности в возрасте 14-22 недели. При этом поверхностные и средние слои роговицы отсекаются с помощью острого лезвия. Из оставшихся слоев роговой оболочки: эндотелиальный пласт, десцеметова оболочка и частично строма непосредственно перед пересадкой вырезают аллотранспалантат диаметром 5-6 мм в стерильных условиях, который помещают в физиологический раствор с антибиотиком.

В условиях операционной осуществляют разрез слизистой и подслизистой оболочки глаза реципиента в его верхненаружном квадранте конъюнктивальными ножницами в 7 мм от лимба, после чего формируют шпателем тоннель под слизистой оболочкой в направлении меридиана 12±30’ ч практически доходя до лимба. После этого в сформированный тоннель вводится полученный ранее аллотрансплантат в непосредственную близость от лимба, обращенным эндотелиальным слоем к эписклере, который затем принимает контуры фиброзной оболочки глаза, примыкая одним концом к лимбу.

Аллотрансплантацию пласта фетальных клеток под слизистую оболочку глаза можно произвести в четырех анатомических областях: в проекции меридиана 12-ти, 3-х, 6-ти и 9-ти ч. Это обусловлено прикреплением к склере в этих меридианах прямых мышц глаза, что не даст возможность трансплантату в теноновом пространстве переместиться из переднего отдела глаза в задний. Однако с косметической целью необходимо использовать меридиан 12 ч, так как область трансплантации прикрыта верхним веком.

Пример конкретного применения данного способа в эксперименте на кроликах

Предварительно перед аллотрансплантацией была создана модель эндотелиально-эпителиальной дистрофии роговой оболочки методом скарификации эндотелиальных клеток канюлей через пароцентез с последующим их вымыванием 40 мл физиологического раствора, направленного под давлением на заднюю поверхность роговицы. Отмечено развитие дистрофии роговицы до 6-7 степени по шкале степеней прозрачности роговицы Войно-Ясенецкого.

На третий день произведена трансплантация пласта эндотелиальных клеток, взятых у слепых новорожденных крольчат (начало регенерации эндотелия по данным литературы). В результате применения пласта эндотелиальных клеток без использования какого либо другого лечения, за исключением инстиляции 20%-ного раствора альбуцида, на 7 день полностью восстановилась прозрачность роговицы, тогда как в контроле отек роговицы сохранялся более 14 дней.

Используемый трансплантат, состоящий из пласта фетальных эндотелиальных клеток с коллагеновыми волокнами, представляет собой ткань, что, как известно, обуславливает при пересадке более разнообразные биологические реакции, усиливающие ее эффективность, чем при трансплантации одной клеточной культуры. Кроме того, в трансплантате сохраняются тесные межклеточные взаимоотношения, что предполагает более адекватные физиологические реакции донорских клеток в ответ на трансплантацию, что позволяет увеличить жизнеспособность трансплантата.

Способ отличается своей простотой, доступностью каждому лечебному учреждению, в котором осуществляется забор, хранение с последующим использованием тканей человека. Он также позволяет снизить материальные затраты путем уменьшения необходимости в приобретении медикаментов для лечения дистрофии роговицы, не требует большого количества используемого инструментария и дорогостоящего лабораторного оборудования. Кроме того, в нем, благодаря тому, что аллотрансплантат располагается в определенном месте, имеется возможность контроля за процессом лечения, а после получения желаемого эффекта - восстановления прозрачности роговицы, аллотрансплантат может быть извлечен из под слизистой оболочки глаза.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Ченцова Е.В. и др., Применение фетальных клеток роговицы человека для лечения различной патологии органа зрения, Офтальмохирургия, 1999, №4, с.2-9.

2. Ченцова Е.В. и др., Фетотерапия эндотелиально-эпителиальной дистрофии роговицы, Актуальные вопросы офтальмологии - Материалы Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 100-летию ГГБ В.А. и А.А. Алексеевых - МНИИ ГБ им. Гельмгольца, Москва, 5-7 декабря, 2000, №2, с.155-157.

3. Кулаков В.И. и др., Трансплантация фетальных тканей человека: анализ состояния проблемы и перспективы развития, Москва, 1996, с.5-9.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ лечения заболеваний роговицы, включающий аллотрансплантацию фетальных клеток, разрез слизистой и подслизистой оболочек глаза, отличающийся тем, что аллотрансплантацию осуществляют пластом фетальных клеток эндотелия роговой оболочки человека с десцеметовой мембраной и частично стромой, который располагают под слизистой оболочкой глаза эндотелиальным слоем к эписклере так, что он принимает контур фиброзной оболочки, примыкая одним концом к лимбу глаза.

2. Способ лечения заболеваний глаза по п.1, отличающийся тем, что пласт стволовых фетальных клеток эндотелия располагают в направлении меридиана 12±30’ час.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что пласт фетальных клеток после восстановления прозрачности роговой оболочки глаза по мере необходимости удаляют.

Версия для печати
Дата публикации 18.05.2007гг

вверх