ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2284039
МЕТОДИКА ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ПАЦИЕНТОВ, СТРАДАЮЩИХ ПОВЕРХНОСТНЫМ РАКОМ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ
Имя изобретателя: Попов Сергей Леонидович (RU)
Имя патентообладателя: Попов Сергей Леонидович (RU)
Адрес для переписки: 664003, г.Иркутск, ул. Фурье, 15, кв.26, С.Л. Попову
Дата начала действия патента: 2004.09.14
Изобретение относится к области
медицины, а именно к онкоурологии, и может
быть использовано при диагностике и
лечении пациентов, страдающих
поверхностным раком мочевого пузыря.
Осуществляют определение концентрации
следующих канцерогенов - анилина, толуилина,
диэтиланилина, дифенила, 1-нафтоламина в
моче и нарушения уродинамики, а также
оценку пролиферативной активности
уротелия по степени экспрессии Ki-67. В случае
высоких концентраций канцерогенов и
нарушений уродинамики, помимо удаления
опухоли и биопсии неизмененной слизистой,
выполняют трансуретральную резекцию
предстательной железы или резекцию шейки
мочевого пузыря, после чего рекомендуют
увеличить потребляемую жидкость в
послеоперационном периоде, уменьшить
контакт с канцерогенами. Через три месяца
осуществляют контрольное исследование и
при сохраняющемся высоком уровне
канцерогенов и отсутствии уменьшения
пролиферативной активности уротелия на
фоне нарушений уродинамики проводят
повторную операцию - цистэктомию. Способ
позволяет осуществить диагностику и
лечение пациентов, страдающих
поверхностным раком мочевого пузыря.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Данный способ относится к разделу
медицины, а именно к онкоурологии, и
рассматривает комплексное ведение
пациентов, страдающих поверхностным раком
мочевого пузыря, и может быть использован в
практической деятельности при
обследовании и лечении пациентов,
страдающих данным заболеванием.
В настоящее время выделяют
множество причин, влияющих на развитие рака
мочевого пузыря. Среди последних выделяют
механическое воздействие на уротелий
мочевого пузыря (наличие катетеров, камней,
инородных тел и т.д.), ионизирующее
воздействие, а также химическое. Не до конца
ясна роль бактерий и вирусов. Наиболее
изученным является влияние различных
химических соединений, которые мы получаем
с продуктами питания, лекарствами, при
контакте с лакокрасочными изделиями, а
также из окружающей среды.
Независимо от характера воздействия
развивается воспаление слизистой,
сопровождающееся усилением
пролиферативной активности с возрастанием
количества мутаций.
Обращает внимание на преобладание среди
пациентов мужчин над женщинами, а так же
увеличение количества, больных мужчин с
увеличением возраста. В связи с чем
существует теория о вреде уростаза (Матвеев
Б.П. Рак мочевого пузыря / Б.П.Матвеев, К.М.Фигурин,
О.Б.Карякин. - М.: Вердана, 2001. - 13 с.). Данная
теория предусматривает наличие
инфравезикальной обструкции,
сопровождающейся высокой концентрацией
мочи, а также развитием опухоли в шейке и
зоне треугольника Льето, в месте
наибольшего контакта с мочей. Среди
химических соединений выделяют анилин и
его производные, акролеин, хлорсодержащие,
обладающие наиболее выраженным
канцерогенным эффектом.
В связи с чем рассматриваем хроническую
задержку мочи у пациентов, страдающих раком
мочевого пузыря как явление, приводящее к
увеличению концентрации канцерогенов в
моче с увеличением времени пребывания в
мочевом пузыре и, как следствие, усиления
контакта уротелия мочевого пузыря с
данными веществами. Предложенный нами
способ выгодно отличается от способа,
предложенного в заявке UA 51226 А. 15.11.2002 тем,
что помимо определения пролиферативной
активности уротелия с целью прогноза
уделено внимание влиянию канцерогенов на
уротелий, а также рассматривается
возможность оценить роль уростаза в
увеличении концентрации канцерогенов в
моче у отдельно взятого больного.
С целью определения концентрации данных
канцерогенов и уточнения их роли
предлагаем - в предоперационном периоде
брать первую утреннюю порцию мочи 250 мл,
проводя следующую пробоподготовку.
Анализируемую пробу мочи помещают в
делительную воронку, на 100 мл мочи добавляют
30 г хлорида натрия и 10 мл хлороформа,
содержимое воронки интенсивно встряхивают
15 минут, после отстаивания хлороформенный
экстракт сливают в пробирку и
центрифугируют для денатурации белка 20
минут. Полученный центрифугат упаривают на
ротационном испарителе с последующим
проведением хромато-масс-спектрометрического
определения содержания анилина, толуидина,
диэтиланилина, дифенила, 1-нафтоламина,
используя оборудование аналитической
американской фирмы Hewllett-Packard на хромато-масс-спектрометре-5989
Engine с масс-селективным детектором.
Программное обеспечение HPG-1034 MS Chem Station (серия
DOS). Колонка кварцевая, капиллярная,
хроматографическая, длиной 30 метров,
внутренний диаметр 0,25 мм, покрытая
неподвижной фазой полиметилсилоксаном с 55
фенильных групп (HP-5MS). Условия проведения
хромато-масс-спектрометрического анализа:
температура испарения 250 градусов по
Цельсию, температура хроматографической
колонки 60 градусов по Цельсию в течение 1
минуты. Затем нагрев со скоростью 12
градусов в минуту до 260 градусов по Цельсию.
Масс-спектры электронного удара
органических соединений получают при
энергии масс-спектр индивидуального
органического соединения (анилин) и
ионизирующих электронов 70 эВ и температуре
масс-селективного детектора 177 градусов по
Цельсию. Диапазон сканирования масс
составляет 45-350 m/z, число сканирований в
секунду 1,2. Число выборок - 2, напряжение на
электронном умножителе 2700 В, ток эмиссии 50
мкА. Измеряют площадь пика молекулярного
иона, для анилина - 93 m\z, для толуидина - 106 m\z,
N,N-диэтиланилина - 134 m\z, дифенила - 154 m\z, 1-нафтиламина
- 143 m\z и по градуировочной характеристике
определяют его массу в пробеге (нг). Время
удерживания: анилин - 4,22 мин, толуидин - 5,37
мин, N,N-диэтиланилин, дифенил - 8,96 мин, 1-нафтиламин
- 10,71 мин. Методика описана в работе:
Определение химических соединений в
биологических средах. Сборник методических
указаний. - М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2000. - 152
с. / Под ред. акад. РАЕН д.м.н. проф. Зайцевой Н.В.,
с. 4 (МУК 4.1.764-99.)
Другой аспект нашей методики - это
прогнозирование, в целом перекликающийся с
заявкой UA 51226 А. 15.11.2002.
До настоящего времени продолжается поиск
критериев для прогнозирования рака
мочевого пузыря.
В связи с чем предлагаю: материал, взятый
при выполнении мультифокальной биопсии во
время проведения трансуретральной
резекции опухоли и коррекции шейки
мочевого пузыря, визуально не измененной,
слизистой мочевого пузыря у пациентов,
страдающих переходно-клеточным раком
мочевого пузыря фиксировать в растворе
формалина, приготовить срезы толщиной 4 мкм
и окрасить Ki-67 с использованием РАР-(пероксидазно-антипероксидазного)
метода, с использованием моноклонального
антитела Ki-67 Antigen фирмы Dako- клон MIB-1 и
проявляющую систему LSAB2 фирмы Dako. Оценка
интенсивности окрашивания проводилась
путем цитофотометрии 50 произвольно
выбранных клеток переходно-клеточного
эпителия на полученных видеоизображениях
окрашенных микропрепаратов с помощью
компьютерной микроскопической
видеосистемы Quantimet 550 IW фирмы Leica, Англия, для
цифрового анализа патоморфологического и
цитологического материала и углубленной
диагностики с камерой высокого разрешения,
позволяющей проводить количественный
анализ изображения по реальным цветам или
оптическим плотностям с форматом
изображения 6000 на 4000 пикселей. Степень
экспрессии Ki-67 предлагаем оценивать в
баллах (max-4), учитывая существование прямой
зависимости между экспрессией Ki-67 и
пролиферативной активностью уротелия (Wu Т.
The role of bcl-2 p-53 and Ki-67 index is predicting tumor recurrence for low
superficial transitional cell bladder carcinoma. / T. Wu, J.N. Chen, Y. Lee //
J. Urol. - 2000. - Vol.163. - P.758-760.) Т.е. одной из задач,
на решение которой направлен предлагаемый
способ лечения, является оценка
пролиферативной активности уротелия с
возможностью прогнозирования течения рака
мочевого пузыря. Исключительно в случае
выявления канцерогенов в достаточно
высоких концентрациях с целью уменьшения
негативного воздействия канцерогенов на
уротелий у пациентов, страдающих
поверхностным раком мочевого пузыря на
фоне хронической задержки мочи за счет
инфравезикальной обструкции, предлагаем
помимо трансуретральной резекции опухоли
мочевого пузыря и мультифокальной биопсии
неизмененной слизистой мочевого пузыря
выполнять ТУР предстательной железы или
инцизию при склерозе шейки мочевого пузыря.
В послеоперационном периоде: увеличение
количества принимаемой жидкости и
уменьшение количества выкуренных сигарет,
а также уменьшение контактов с различными
химическими реагентами на работе и в быту с
проведением контрольного исследования
уровня концентрации канцерогенов в моче и
мультифокальной биопсии через 3 месяца по
изложенной выше методике, а также оценки
объема остаточной мочи. В случае изменений
уродинамики в сторону увеличения объема
остаточной мочи с ростом концентрации
канцерогенов в послеоперационном периоде и
сохраняющимся высоким уровнем экспрессии
Ki-67 после проведенного лечения предлагаю
рассматривать как неблагоприятный прогноз
с необходимостью проведения цистэктомии.
Аналогов по сочетанному определению
концентрации канцерогенов в моче и
пролиферативной активности уротелия с
целью уточнения прогноза и тактики ведения
пациента в литературе не найдено. К
недостаткам относятся инвазивность
способа и высокая цена анализов.
Пример 1
Пациент К., 35 лет, №2497 поступил 24 февраля
2004 г. в МУЗ КБ1 с диагнозом: Переходно-клеточный
рак мочевого пузыря. Гематурия. 1 марта 2004
года. Из анамнеза на протяжении 2 лет
безуспешно лечит трихомонадный простатит,
курит. При подготовке к операции взята моча
- 250 мл утром после сна. Проведено
исследование по описанной методике,
выявлен анилин в концентрации 0,0022 мг в
объеме 250 мл мочи. Объем остаточной мочи
составил 80 мл.
Операция: ТУР мочевого пузыря. Инцизия
предстательной железы. Мультифокальная
биопсия мочевого пузыря. Первичное
гистологическое заключение опухоли 6984-87 от
02.03.04 г. переходно-клеточный рак, в визуально
неизмененной слизистой картина
лимфоцитарной инфильтрации.
Материал приготовлен и исследован по
вышеизложенной методике.
Экспрессия Ki-67 составила 3,67 балла.
В дальнейшем пациент прошел курс
химиотерапии и лечения иммунопрепаратами.
При контрольном обследовании через 3
месяца (цистоскопия, мультифокальная
биопсия) объем остаточной мочи не
определяется, концентрация анилина
снизилась до 0,00009 мг в 250 мл мочи. Повторно
проведена оценка пролиферативной
активности уротелия по предлагаемой
методике, степень экспрессии Ki-67 снизилась
до 1,45 балла. Клинически пациент отмечает
улучшение самочувствия и отсутствие
дизурии, данных за рецидив заболевания на
момент обследования нет.
Пример 2
Пациент А., 70 лет, №13561, поступил в МУЗ КБ 1 г.Иркутска
22 ноября 2003 г. с диагнозом: Гематурия
неясного генеза. В анамнезе: стаж
курильщика 35 лет. В предоперационном
периоде взята моча 250 мл утром после сна,
проведено исследование по вышеизложенной
методике и выявлен дифенил 0,009 мг в объеме 250
мл мочи, другие соединения не выявлены. При
проведении УЗИ объем остаточной мочи
составил 150 мл. В дальнейшем выполнена
операция: трансуретральная резекция
мочевого пузыря, мультифокальная биопсия,
визуально не измененной, слизистой
мочевого пузыря, а также трансуретральная
резекция предстательной железы, назначена
противовоспалительная терапия. ПГЗ 35703-709 от
2 декабря Высоко дифференцированный
переходно-клеточный рак мочевого пузыря, в
визуально неизмененной слизистой картина
воспаления. Ki-67 составил 3,2 балла.
На протяжении трех месяцев пациент
получал адъювантную химиотерапию, по
нашему настоянию уменьшил число
употребляемых сигарет с 45 до 10 шт. в сутки, а
также увеличил количество употребляемой
жидкости. При контрольном обследовании
мочи по данной методике выявлено снижение
концентрации дифенила до 0.00013 мг в объеме 250
мл мочи. Объем остаточной мочи составил 20 мл.
Проведены цистоскопия и мультифокальная
биопсия. Экспрессия Ki-67 составила 2 балла.
При этом в ходе контрольного обследования
не выявлено рецидива, пациент отметил
улучшение самочувствия и уменьшение
дизурии.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ диагностики и лечения
пациентов, страдающих поверхностным
раком мочевого пузыря, отличающийся тем,
что определяют концентрации следующих
канцерогенов - анилина, толуилина,
диэтиланилина, дифенила, 1-нафтоламина в
моче и нарушение уродинамики, а также
оценивают пролиферативную активность
уротелия по степени экспрессии Ki-67 и в
случае высоких концентраций
канцерогенов и нарушения уродинамики,
помимо удаления опухоли и биопсии
неизмененной слизистой, выполняют
трансуретральную резекцию
предстательной железы или резекцию шейки
мочевого пузыря, после чего рекомендуют
увеличить потребляемую жидкость в
послеоперационном периоде, уменьшить
контакт с канцерогенами, через три месяца
осуществляют контрольное исследование и
при сохраняющемся высоком уровне
канцерогенов и отсутствии уменьшения
пролиферативной активности уротелия на
фоне нарушений уродинамики проводят
повторную операцию - цистэктомию.
Версия для печати
Дата публикации 06.01.2007гг
вверх
|
