ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2257584
(14) Дата публикации: 2005.07.27
(21) Регистрационный номер заявки: 2003118744/15
(22) Дата подачи заявки: 2003.06.25
(24) Дата начала отсчета срока действия патента: 2003.06.25
(43) Дата публикации заявки: 2004.12.20
(45) Опубликовано: 2005.07.27
(56) Аналоги изобретения: RU 2184968 С1 10.07.2002. RU 2014598 С1 15.06.1994. RU 2077729 С1 20.04.1997. RU 2123698 С1 20.12.1998. SU 1348732 А1 30.10.1987. АКУШЕРСТВО. Под ред. Г.М.Савельевой. - М.: Медицина, 2000, с. 286-287. PAPADOPOULOS N. et al. Large granular lymphocytes (LGLS) activity in women with spontaneous abortions during the 1st trimester gestation. Panminerva Med. 2002, 44(4), p. 343-347.
(72) Имя изобретателя: Посисеева Л.В. (RU); Сотникова Н.Ю. (RU); Колесникова И.К. (RU); Анциферова Ю.С. (RU); Лопаткина Н.М. (RU); Бойко Е.Л. (RU)
(73) Имя патентообладателя: ГУ "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова" МЗ РФ (RU)
(98) Адрес для переписки: 153731, г.Иваново, ул. Победы, 20, ГУ "Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова" МЗ РФ
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОГО ДЕТОРОЖДЕНИЯ У ЖЕНЩИН С НЕВЫНАШИВАНИЕМ РАННИХ СРОКОВ
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования восстановления эффективного деторождения у женщин вне беременности с невынашиванием ранних сроков (до 12 недель) в анамнезе.
Актуальность изобретения определяется высокой частотой встречаемости невынашивания беременности ранних сроков. По данным отечественных авторов частота невынашивания составляет от 13 до 17% (4), оставаясь одной из главных причин перинатальной патологии и смертности. Потери детей, как следствие невынашивания, по данным как отечественных, так и зарубежных авторов, составляют от 35 до 78% (4, 6).
Известен способ прогнозирования невынашивания беременности по результатам клинико-морфологического анализа (5). Заключается он в следующем: в патологоанатомическое отделение поступает операционный материал хориальной ткани и эндометрия, полученный в ходе выскабливания полости матки беременных женщин с начавшимся внебольничным абортом. В компьютер вносятся результаты морфологического исследования, морфометрические показатели, а также сведения о соматической и гинекологической патологии, данные бактериологического, ультразвукового исследования, биохимические и иммунологические показатели. Предложенная авторами программа формирует прогностическую шкалу факторов риска развития данного внебольничного выкидыша с удельным весом влияния каждого фактора, а также вычислить вероятность повторных выкидышей. Недостатки способа:
1. Используется патоморфологический материал от внебольничных выкидышей, поступающий зачастую в отдаленные сроки.
2. Экстренность ситуации не всегда дает возможности оценки материала по указанной программе.
3. Не указана точность способа.
Наиболее близким по техническому решению к заявленному способу является способ прогнозирования привычного невынашивания путем исследования иммунологического профиля лейкоцитов в супружеской паре (1). На основе показателей HLA-антигенов I и II классов определялась дискриминантная функция F по формуле:
F(х)=0,78А1+0,74А9+0,77А11+1,71А28-0,94А29-0,95В21+5,04В39-1,54В57-1,87В65-0,22Дr5+1,39Дr7-0,83МА9+0,56ма10-1,12МА28+1,73МА29-0,74МВ5+0,56МВ7+071МВ8+1,11МВ12+1,62МВ14-0,65МВ27-0,61МВ53-0,83МDr2-1.60МДr32-0,51МДr5-0,67МДr7-0,46
где: А1; А9; A11; A28; А29 - гены А локуса жены,
МА9; МА10; МА28; МА29 - гены А локуса мужа,
В21; В39; В57;В65 - гены В локуса жены,
МВ5; МВ7;МВ8; МВ12; МВ14; МВ27; МВ53 - гены В локуса мужа,
Дr5; Дr7 - гены Дr локуса жены,
МДr2; МДr3; МДr5; МДr7 - гены Дr локуса мужа, и при значении F>0 прогнозируют привычное невынашивание, а при F<0 дают заключение об отсутствии угрозы невынашивания беременности.
Данный способ был выбран нами в качестве ближайшего аналога. Однако он имеет ряд недостатков:
1. Дороговизна исследования.
2. Отсутствие реагентов в "Реестре новых медицинских средств и технологий", разрешенных МЗ РФ.
3. Высокая трудоемкость.
4. Авторы не указывают точность, специфичность и чувствительность способа.
Указанные недостатки предлагается устранить в предлагаемом способе.
Заявленный технический результат достигается тем, что в периферической крови женщин вне беременности с невынашиванием ранних сроков в анамнезе определяют относительное количество СД38+ лимфоцитов и при значениях этого показателя равном или более 12%, прогнозируют восстановление эффективного деторождения в 86% случаев.
Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать восстановление эффективного деторождения по определению относительного содержания СД38+ лимфоцитов в периферической крови.
Ранее показатель содержания СД38+ лимфоцитов в периферической крови определяли для прогнозирования быстрого роста миомы матки (3).
Для прогнозирования восстановления эффективного деторождения этот показатель применяется впервые.
Способ осуществляется по стандартной методике следующим образом (1): 1 мл крови из локтевой вены забирают в пробирку, содержащую 25 ед. гепарина, добавляют 1 мл среды 199 и подслаивают 1 мл фиколл-верографина с плотностью 1,078.
Клеточную фракцию лимфоцитов получают стандартным методом скоростного центрифугирования при 1500 об/мин в течение 20 мин (1). Лимфоциты собирают в интерфазе среда 199-фиколл-верографин и отмывают 2 раза средой 199 центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин(8). Далее, в соответствии с инструкцией фирмы-разработчика моноклональных антител (Мед-Биоспектр, г. Москва, регистрационный № 29/240/70700/2013-03 от 14.06.01),100 мкг клеток в концентрации 1×10 кл/мл инкубируют с 20 мкл моноклональных анти-СД38+ антител, меченных FITC, в течение 30 мин, при комнатной температуре, после чего клетки отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора. Учет реакции поводят на проточном цитометре, определяя относительное содержание СД38+ клеток в лимфоцитарном гейте.
Использование предлагаемого способа позволяет с высокой точностью прогнозировать восстановление эффективного деторождения у женщин с ранними самопроизвольными выкидышами в анамнезе.
Отличительный признак - установлен прогностический параметр относительного содержания СД38+ лимфоцитов в периферической крови, при количественных значениях которого 12% и более прогнозируется эффективное деторождение у женщин с невынашиванием беременности ранних сроков.
Сущность изобретения поясняется следующими примерами:
Пример 1.
Пациентка А., 29 лет, поступила на обследование в гинекологическое отделение по поводу невынашивания беременности и нарушения менструальной функции. В анамнезе: 1 - соевременные роды, 2 - медицинских аборта, 1 - самопрозвольный выкидыш в сроке 5 недель беременности. По тестам функциональной диагностики-сочетание ановуляторных циклов с циклами с недостаточностью лютеиновой фазы. В ходе гормонального обследования выявлена гиперпролактинемия, гиперандрогения. При гистологическом исследовании биоптата эндометрия установлено наличие сочетания признаков хронического эндометрита с гормональными нарушениями в структуре эндометрия. Выявлена хламидийная инфекция. Заключение терапевта: гипертоническая болезнь 1А стадии, хронический пиелонефрит, хронический бронхит, ожирение I стадии. Поставлен клинический диагноз: Невынашивание беременности. Гипоталамический синдром, нейроэндокринная форма, на фоне ожирения 1 ст., с нарушением менструальной функции. Гиперпролактинемия. Гиперандрогения. Хронический эндометрит. Хламидиоз.
При обследовании заявляемым способом установлено содержание СД38+ лимфоцитов в периферической крови - 22,3%, что выше заявляемого прогностического параметра (>12%) на восстановление эффективного деторождения. Эти данные позволили прогнозировать благоприятное восстановление детородной функции. После проведенного противовоспалительного лечения, коррекции менструального цикла наступила беременность, которая закончилась своевременными родами и рождением здорового ребенка. Заключение: прогноз по заявляемому способу подтвердился.
Пример 2.
Пациентка Б., 27 лет, поступила на обследование по поводу первичного невынашивания беременности (первая беременность закончилась самопроизвольным выкидышем в сроке 9-10 недель). По тестам функциональной диагностики - цикл двухфазный, с недостаточностью II фазы. По данным гормонального обследования установлена гиперпролактинемия, гипопрогестеронемия, при морфологическом исследовании эндометрия - сочетание хронического эндометрита с гормональными нарушениями в структуре эндометрия. Выявлена CMV-инфекция и генитальный герпес.
Поставлен клинический диагноз: Первичное невынашивание беременности. Олигоменорея. Гиперпролактинемия. Хронический эндометрит.
При обследовании заявляемым способом: содержание СД38+ лимфоцитов в периферической крови - 10,6%, что ниже заявляемого параметра и позволяет прогнозировать неэффективное деторождение. Несмотря на проведенное специфическое противовоспалительное лечение, терапию, направленную на коррекцию выявленных гормональных нарушений, последующая беременность закончилась самопроизвольным выкидышем в сроке 8-9 недель. Прогноз по заявляемому способу подтвердился - восстановление эффективного деторождения не произошло.
Пример 3.
Пациентка В., 37 лет, была направлена в клинику с диагнозом: Привычное невынашивание беременности (в анамнезе три беременности закончились самопроизвольными выкидышами в сроке 7-8 недель). В ходе клинического обследования установлено: менструальный цикл - двухфазный, уровень гормонов в периферической крови, моче в пределах нормальных значений. При морфологическом исследовании эндометрия установлено наличие воспалительных изменений в структуре эндометрия. Выявлен хламидиоз и кандидоз. Поставлен клинический диагноз: Привычное невынашивание беременности на фоне хронического эндомиометрита.
При обследовании заявляемым способом содержание СД38+ лимфоцитов в периферической крови - 15,8%, что позволяет прогнозировать восстановление эффективного деторождения. Проведено противовоспалительное лечение с учетом выявленных возбудителей. Последующая беременность закончилась очередным выкидышем в сроке 6-7 недель, после перенесенной ОРВи в тяжелой форме. Прогноз по заявляемому способу не подтвердился в связи с осложнениями беременности.
Указанным способом, на базе гинекологической клиники Ивановского НИИ материнства и детства им. В.Н.Городкова МЗ РФ, обследованы 22 пациентки. Данные исследований приведены в таблице №1. Наблюдение за больными осуществлялось в течение года.
Преимущества заявляемого способа:
1. Высокая точность - 86,36%, чувствительность - 93,33%, специфичность - 71,42.
2. Нетравматичность
3. Обследование женщин возможно в амбулаторных условиях, не требует привлечения многочисленного персонала и не приводит к временной утрате трудоспособности.
4. Прогноз состоятелен в течение года от момента зачатия до родов.
Таблица 1
Показатель Количество женщин
Всего женщин 22
Истинно положительный результат 14
Ложноположительный результат 2
Истинно отрицательный результат 5
Ложноотрицательный результат 1
Итого: точность заявляемого способа - 86,36%; чувствительность - 93,33%; специфичность - 71,42%.
Литература
1. Данькова И.В., Башмакова Н.В., Мазуров А.Д. Способ прогнозирования привычного невынашивания путем исследования иммунологического профиля лейкоцитов в супружеской паре. Изобретения. Полезные модели. 10.07.02 № 21849668.
2. Иммунологические методы (под редакцией Фримеля). // М. - „Мир". – 1979 с. 518.
3. Посисеева Л.В., Малышкина А.И., Суворкина Е.Е. и др. Способ прогнозирования роста лейомиомы матки. Заявка № 2002119498, от 17.07.02.
4. Татаринов Ю.С., Посисеева Л.В., Петрунин Д.Д. Специфический альфа2 - микроглобулин (гликоделин) репродуктивной системы человека: 20 лет от фундаментальных исследований до внедрения в клиническую практику. - Москва-Иваново, 1998. – 127 с.
5. Федорина Т.А., Сизова Н.В. Прогностический алгоритм возникновения внебольничных выкидышей по результатам клинико-морфологического анализа. Самарский государственный медицинский университет, сборник научных трудов, кафедра патологической анатомии, 1999.
6. Ahmed A.G. Klopper A.I.Serum concentration ofplacental proteins in no pregnant and pregnant subjects // Arch. Gynec. - 1987. - V.237 – N1. - P.41-49.
7. Boyum A. Isolation of mononuclear cell fund granulocytes from human blood and bone marrow. // Scahd. J. Clin. Lab. Inivest. - 1968, - v.21. - № 97. - р.7.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ прогнозирования восстановления эффективного деторождения у женщин с невынашиванием ранних сроков путем исследования периферической крови, отличающийся тем, что вне беременности определяют относительное содержание СД38+ лимфоцитов и при их значениях, равных или больших 12%, прогнозируют эффективное восстановление детородной функции.
