ИЗОБРЕТЕНИЕ
Патент Российской Федерации RU2249214
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНДОТОКСИКОЗА
Имя изобретателя: Соловьев А.А. (RU); Жижин Ф.С. (RU); Новоселов А.А. (RU); Ахметов Р.Ф. (RU); Старчиков С.В.
Имя патентообладателя: Соловьев Александр Александрович
Адрес для переписки: 426034, г.Ижевск, ул. Коммунаров, 281, мед. академия, кафедра гистологии, А.А.Соловьеву
Дата начала действия патента: 2003.04.22
Изобретение относится к медицине, в
частности к хирургии, гинекологии,
токсикологии, может быть использовано в
ветеринарии. Проводят микроэлектрофорез
эритроцитов в знакопеременном
электрическом поле с частотой смены знака
0,3–1 Гц. Используют электрическое поле с
величиной тока 4,5-5,0 мА. Воздействие
проводят при температуре 36-38°С. При наличии
амплитуды колебания эритроцитов от 3 мкм и
менее определяют наличие эндотоксикоза.
Способ позволяет упростить и повысить
точность определения эндотоксикоза.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Изобретение относится к медицине, в
частности к хирургии, гинекологии,
онкологии, токсикологии, может быть
использовано в ветеринарии.
Известен способ определения
эндогенной интоксикации по молекулам
средней массы (МСМ) (Н.И.Габриэлян, В.И.Липатова.
Опыт использования показателя средних
молекул крови для диагностики
неврологических заболеваний у детей.
Журнал "Лабораторное дело", 1984, №3, с.138),
который состоит в том, что сыворотку крови
больного обрабатывают 10% раствором
трихлоруксусной кислоты в соотношении 1:0,5,
центрифугируют, разбавляют
дистиллированной водой надосадочную
жидкость в 9 раз. Измерение производят на
спекрофотометре СФ-46 в УФ-свете при длине
волны 254 нм. При этом определяют так
называемые средние молекулы с молекулярной
массой 500-5000 дальтон, которые считают
белковыми токсинами.
Недостатками известного способа являются
неполная объективность и точность,
поскольку суммарную токсическую
активность сыворотки больного составляют
не только белковые МСМ, но и
низкомолекулярные пептиды, а также
небелковые метаболиты и токсины,
соотношение которых при интоксикации
вариабельно. Кроме того, до конца не изучен
вопрос, касающийся молекулярных основ
строения и функции МСМ, на определении
которых базируется метод исследования.
Необходимо также отметить, что уровень МСМ
может изменяться с изменением характера
белкового метаболизма, не связанного с
эндотоксикозом.
Известен также способ определения
токсических свойств крови и лимфы с помощью
парамеций при экзо- и эндотоксикозах,
принятый нами за прототип (Пафомов Г.А.,
Бурдыга Ф.А., Ширинова М.Н. Экспресс- метод
определения токсических свойств крови и
лимфы с помощью парамеций при экзо- и
эндотоксикозах. Журнал "Советская
медицина", 1980, №9, с. 42-44), состоящий в том,
что на стекло наносят 0,01 мл испытуемой
среды и равный объем взвеси, содержащий от 8
до 10 парамеций. Обе капли тщательно
перемешивают. Определяют время гибели
половины количества парамеций (LD 50) и гибели
всех клеток (LD100). При этом для анализа
используют чистую линию Paramecim caudatum, которую
выращивают в настое сена, стебля или корок
банана в кипяченой воде с температурным
режимом 20-23°С, являющимся оптимальным для
их жизни и размножения.
Недостатком известного способа является
низкая точность в связи с тем, что анализу
подвергается одна функция клетки – ее
подвижность, которая не является суммарной
характеристикой жизни клеток, поскольку
неподвижность является не признаком смерти,
а лишь парабиоза. Недостатком является
также необходимость трехкратного
исследования, что подчеркивает невысокую
объективность однократного анализа.
Следует отметить также невысокий уровень
стандартизации парамеций, связанный с
нестабильностью используемой питательной
среды: сена, стеблей растений и корок банана
в кипяченой воде, которые могут иметь
экологические или технологические
загрязнители и не могут быть использованы в
качестве эталона. Кроме того, оптимальный
температурный режим жизнедеятельности
инфузорий 20-23°С не коррелирует с
оптимальной температурой для исследования
сыворотки и определения жизнедеятельности
ее белков, ориентированных на постоянство
температуры в интервале 36-38°С.
Задачей заявляемого изобретения является
повышение точности определения
эндотоксикоза.
Данная задача решается тем, что согласно
способу определения эндотоксикоза,
заключающегося в определении
жизнеспособности клеток, в качестве клеток
используют эритроциты, которые помещают в
знакопеременное электрическое поле с
величиной тока 4,5-5,0 мA при температуре 36-38°С
и при наличии амплитуды колебания от 3 мкм и
менее судят о наличии эндотоксикоза.
Преимуществом заявляемого способа
является сочетанное исследование клеток и
плазмы крови, что повышает точность анализа.
Другим преимуществом является возможность
анализа на основе минимальных масс/ объемов
крови, в частности достаточно 3 мг крови. Это
позволяет проводить мониторинг
эндотоксикоза по крови больного. Важным
аспектом метода является точность,
короткое время исследования (10-15 минут),
высокая степень персонификации данных,
отсутствие необходимости в реактивах,
отсутствии сложностей в технологии
методики, экономичность.
Способ осуществляют следующим образом. По
стандартной методике проводят
скарификацию и получают минимальный объем
крови в капилляр или на поверхность
скарификатора. Кровь разводят в 20-50 раз
раствором 0,9% хлорида натрия или
забуференным физиологическим раствором (фосфатный
буфер). Полученный субстрат помещают между
двумя покровными стеклами в термостатную
камеру для последующего цитологического
микроэлектрофореза. Исследуют под
микроскопом с увеличением объектива 8, 20, 40
раз, в течение 10-15 минут проводят
цитологический микроэлектрофорез (подвергая
клетки воздействию знакопеременного
электрического поля с величиной тока 4,5-5,0 мA
и частотой смены знака 0,3-1 Гц). На основе
показателей амплитуды колебаний
эритроцитов от 3 мкм и менее констатируют
наличие или степени выраженности
эндотоксикоза.
Пример 1. Больной Т., 69 лет. Диагноз: Острая
обтурационная толстокишечная
непроходимость. Распространенный серозный
перитонит.
При исследовании заявленным способом в
первые сутки после операции амплитудный
тест составил 2 мкм, что свидетельствует о
выраженной степени интоксикации.
Выраженность эндотоксикоза по другим
лабораторным исследованиям составила:
молекулы средней массы/индекс
распределения - 0,473/4,09, лейкоцитарный индекс
интоксикации - 3,93, гематологический
показатель интоксикации - 18,7.
Далее проводилась дезинтоксикационная
терапия. На седьмые сутки после
оперативного лечения общее состояние
больного удовлетворительное, амплитудный
показатель 5 мкм, молекулы средней массы/индекс
распределения - 0,44/3,09, лейкоцитарный индекс
интоксикации - 4,0, гематологический
показатель интоксикации - 7,4. При этом
клиническая картина, амплитудный тест
свидетельствуют об отсутствии
эндотоксикоза. А другие показатели
эндогенной интоксикации еще
свидетельствуют об эндотоксикозе. На
десятые сутки нахождения пациента в
стационаре тесты составили: амплитудный
показатель 7 мкм, молекулы средней массы/индекс
распределения - 0,24/1,09, лейкоцитарный индекс
интоксикации - 1,5, гематологический
показатель интоксикации - 6,2. Таким образом,
исследуемый параметр более чувствителен,
раньше определяет наличие или отсутствие
эндогенной интоксикации, чем другие
клинические и биохимические показатели. На
основании этого было констатировано
уменьшение, а в последующем отсутствие
эндотоксикоза. Через короткое время
больной был осмотрен: эндотоксикоз не
выявлен.
Пример 2. Больной М., 45 лет. Диагноз:
распространенный гнойный перитонит.
Эндогенная интоксикация.
В первые сутки после операции анализы
крови: гемоглобин - 70 г/л, эритроциты - 2,78·10/
12/л, молекулы средней массы - 0,34, индекс
распределения - 0,97, лейкоцитарный индекс
интоксикации - 3,2, гематологический
показатель интоксикации - 19,4.
Амплитудный тест составил 2 мкм.
Проводились санационные релапаротомии,
интенсивная терапия. Эндогенная
интоксикация уменьшалась, что было
доказано амплитудным тестом (5 мкм) и
клинической картиной. Другие показатели
крови еще свидетельствуют об эндотоксикозе:
молекулы средней массы/индекс
распределения - 0,54/4,09, лейкоцитарный индекс
интоксикации - 5,0, гематологический
показатель интоксикации - 9,4. В данном
случае наиболее чуствительный - это
амплитудный тест. Реакция других
показателей эндогенной интоксикации
несколько замедленная на одиннадцатые
сутки после операции. При дальнейшем
лечении показатели крови
свидетельствовали об отсутствии
эндотоксикоза: амплитудный тест (7 мкм),
молекулы средней массы/индекс
распределения - 0,24/1,05, лейкоцитарный индекс
интоксикации - 2,0, гематологический
показатель интоксикации - 4,3. Таким образом,
исследуемый параметр определения
эндотоксикоза (амплитудный тест) наиболее
чувствительный и быстрее реагирующий на
изменение внутренней среды организма
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способ определения
эндотоксикоза, включающий проведение
микроэлектрофореза эритроцитов в
знакопеременном электрическом поле с
частотой смены знака 0,3 – 1 Гц,
отличающийся тем, что используют
электрическое поле с величиной тока 4,5-5,0
мA, воздействие проводят при температуре
36-38°С и при наличии амплитуды колебания
эритроцитов от 3 мкм и менее определяют
наличие эндотоксикоза
Версия для печати
Дата публикации 22 июня 2007 г.
вверх
|
